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目的:本课题以提取的鼠疫F1抗原和重组鼠疫V抗原免疫小鼠,豚鼠两种动物模型,评价鼠疫亚单位疫苗的免疫效果,为鼠疫疫苗研制奠定基础。方法:1.在小鼠动物模型上,本课题用F1和rV与氢氧化铝进行物理混合后免疫小鼠。通过脾淋巴细胞增殖实验、脾淋巴细胞细胞因子,流式细胞分析术和抗体滴度的测定四种方法对F1和rV蛋白疫苗的免疫原性进行了初步评价。2.在豚鼠动物模型上,实验采用不同剂量的F1和rV抗原与氢氧化铝佐剂进行物理混合后免疫豚鼠,以探求合适的疫苗浓度;通过分离免疫后不同时间的外周血单个核细胞进行增殖实验,对疫苗末次注射八周后的豚鼠进行过敏性迟发型超敏反应实验,并测定免疫后不同时间抗体滴度等实验,对F1和rV蛋白疫苗的免疫原性进行了评价。3.在疫苗效力保护实验中,通过不同剂量的鼠疫双组分疫苗免疫小鼠,并于一周后用一定剂量的鼠疫菌株对实验小鼠进行攻击,选择一定的时间对小鼠脾脏的细菌进行培养计数,从而观察疫苗的保护效果。结果:1.小鼠动物模型结果:ELISA检测结果显示F1+rV+Al(OH)3组有较强的体液免疫应答;ELISPOT,MTT细胞增殖结果显示F1+rV+Al(OH)3组在不同时间点经F1,rV抗原刺激后分泌IFN-r的脾脏淋巴细胞数均高于其余各组。2.豚鼠动物模型结果:ELISA检测结果显示各疫苗组均有较强的体液免疫应答,同时活疫苗组对F1抗原特异性的体液IgG效价明显高于其余各组,结果具有统计学意义。MTT细胞增殖结果显示不同剂量的疫苗组F1+rV组及活疫苗组在不同时间点经F1,rV抗原刺激后的增殖与阴性对照组无显著性差异;迟发型超敏反应显示F1+rV复合疫苗能介导较强的细胞免疫应答。3.疫苗效力保护实验结果显示阴性对照组有数量不等的菌落生长,而疫苗组小鼠脾脏均无细菌生长。结论:鼠疫双组分疫苗能引起小鼠和豚鼠明显的免疫应答,Al(OH)3佐剂能够显著提高其应答水平,同时对小鼠具有一定的保护力。确证了其与氢氧化铝佐剂物理混合后能够激发高水平的免疫应答,为进一步研制新型鼠疫疫苗奠定了基础