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目的探明食管鳞癌中LSD1与Notch信号通路的相互调节作用及调节机制。方法1.LSD1与Notch通路相关蛋白在不同食管鳞癌细胞株中的表达情况。蛋白免疫印迹法(Western blot)检测食管鳞癌细胞株KYSE450、KYSE790、ECa109、EC9706和TE1中LSD1及Notch通路相关蛋白Notch1、DTX1和Hes1的表达情况。2.LSD1对Notch信号通路的调控作用。用LSD1抑制剂TCP与LSD1 si RNA处理食管鳞癌细胞,Western blot检测处理前后细胞中LSD1、组蛋白H3K4me2和Notch信号通路相关蛋白DTX1和Hes1的表达情况;3.染色质免疫沉淀反应(Chromatin Immunoprecipitation,Ch IP)验证ECa109细胞中LSD1与Notch信号通路靶基因Hes1、Notch3、DTX1和CR2启动子不同区域的结合情况。4.新型Notch信号通路抑制剂FLI-06对食管鳞癌ECa109和EC9706细胞的增殖、凋亡及周期的影响。CCK-8法检测FLI-06对食管鳞癌细胞的增殖作用;然后采用流式细胞术检测FLI-06对食管鳞癌细胞凋亡和周期的影响。5.Notch信号通路对LSD1的调控。食管鳞癌细胞中,用不同浓度FLI-06与γ-分泌酶抑制剂GSI-DAPT分别处理食管鳞癌ECa109和EC9706细胞48 h后,Western blot检测Notch通路相关蛋白Notch3、DTX1和Hes1及LSD1与组蛋白H3K4me2的表达情况。结果1.五株食管鳞癌细胞中均存在LSD1及Notch信号通路相关蛋白的表达,且表达水平不同。2.LSD1抑制剂TCP处理48 h后,KYSE450、KYSE790、ECa109、EC9706和TE1细胞中LSD1的表达均降低,其组蛋白H3K4me2的表达升高,Notch信号通路相关蛋白的表达也均降低;LSD1 si RNA同样使ECa109细胞中LSD1与Notch信号通路相关蛋白表达受到抑制。3.染色质免疫沉淀反应证实LSD1能与Notch靶基因的启动子区域结合。4.FLI-06抑制食管鳞癌ECa109和EC9706细胞的增殖,并且具有浓度依赖性,其中FLI-06对ECa109和EC9706细胞48 h的IC50分别为(5.814±0.053)μM和(10.741±0.049)μM;流式细胞术结果显示,FLI-06以不同浓度处理ECa109和EC9706细胞48 h后,随着药物浓度增加,细胞的凋亡率显著增加,G1期细胞数增加,表明FLI-06能诱导细胞的凋亡,且能将细胞阻滞于G1期。5.FLI-06和GSI-DAPT处理食管鳞癌ECa109和EC9706细胞48 h后,Notch3、DTX1和Hes1等Notch通路相关蛋白表达降低,Notch信号通路受到抑制;LSD1表达降低,组蛋白H3K4me2表达水平没有变化。结论1.食管鳞癌细胞中LSD1对Notch信号通路有调节作用,且LSD1可能是通过与Notch靶基因的启动子区域结合从而对Notch信号通路起到调节作用。2.在食管鳞癌细胞中,Notch信号通路对LSD1也具有调控作用。