移植的骨髓基质干细胞在兔腰椎间盘内分化的研究

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移植的骨髓基质干细胞在兔腰椎间盘内分化的研究 前言 椎间盘退变常导致髓核突出、椎管狭窄和脊柱节段不稳而引起腰腿痛。临床上对于腰椎间盘退变缺少有效的治疗方法。为了干预和修复退变的椎间盘,国内外学者先后尝试了细胞因子治疗、细胞移植治疗和基因治疗的生物学方法。骨髓基质干细胞(MSCs)作为干细胞的一种,具有多方向分化的潜能,现已证实MSCs可以在体外诱导分化为骨细胞、软骨细胞、肝细胞、腱细胞,骨骼肌细胞,心肌细胞和神经细胞等。本实验的目的就是研究移植的MSCs在兔椎间盘内的分化情况,探讨其作为一种治疗细胞,修复退变的椎间盘的可能性。 方法 一、动物来源 1-2月龄(体重0.5-1Kg)及一岁龄(体重3-5Kg)的健康日本大耳白兔(不分雌雄),由中国医科大学动物部提供并饲养。 二、MSCs的体外培养 利用梯度密度离心法分离获取幼兔股骨MSCs,以1×106/ml的密度接种于培养瓶中。3天后第一次换液,以后隔天换液。待原代培养细胞融合成单层后,即可1:3传代培养。 三、动物模型的建立 取健康一岁龄日本大耳白兔12只,侧前方入路显露兔子的椎间盘,每只兔子取L4-5和L5-6两个椎间盘用于实验。用牙科钻打开椎间盘,取出髓核,其中L4-5椎间盘用注射器注入不含细胞的培养液作为对照组,L(5-6)椎间盘注入用Brdu标记过的骨髓基质干细胞作为实验组。 四、免疫组化检测 8周后处死动物,取出标本进行免疫组化检测。胞浆为红色,胞核为紫
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