雄激素受体负向调节雄激素非依赖性前列腺癌细胞FN1和ZNF438基因的表达

来源 :温州医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:huruiwangmin
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目的:  验证FN1和ZNF438是否为雄激素非依赖性前列腺癌细胞雄激素受体靶基因,并探索雄激素受体对FN1和ZNF438基因的表达调节作用。  方法:  1.采用染色质免疫共沉淀-实时荧光定量PCR(ChIP-PCR)及琼脂糖凝胶电泳技术验证雄激素受体(AR)作用于FN1和ZNF438基因。  2.用双氢睾酮(DHT)刺激LNCaP-AI细胞后,通过逆转录荧光定量PCR(RT-qPCR)和蛋白质免疫印迹(Western blot)分析FN1和ZNF438基因的表达情况。  3.慢病毒干扰LNCaP-AI细胞雄激素受体(AR)的表达后,通过逆转录荧光定量PCR(RT-qPCR)和蛋白质免疫印迹(Western blot)分析FN1和ZNF438基因的表达情况。  4.慢病毒干扰LNCaP-AI细胞雄激素受体(AR)的表达后,通过CCK-8试验和Transwell试验分析LNCaP-AI细胞增殖及细胞迁移能力变化。  结果:  1.ChIP-PCR和琼脂糖凝胶电泳的结果显示AR-ChIP实验组所富集到的FN1和ZNF438基因显著高于IgG-ChIP对照组所富集到FN1和ZNF438基因的量。  2.用雄激素处理LNCaP-AI细胞后,胞质雄激素受体(AR)向细胞核转移;与此同时,LNCaP-AI细胞FN1和ZNF438基因在mRNA和蛋白水平表达下降。  3.用shAR慢病毒载体干扰LNCaP-AI细胞雄激素受体(AR)的表达后,LNCaP-AI细胞FN1和ZNF438基因在mRNA和蛋白水平表达上升。  4.用shAR慢病毒载体干扰LNCaP-AI细胞雄激素受体(AR)的表达后,LNCaP-AI细胞增殖减慢,而其迁移能力却得到了提高。  结论:  FN1和ZNF438基因为雄激素非依赖性前列腺癌LNCaP-AI细胞雄激素受体负向调节的靶基因,本研究有可能为进一步研究雄激素非依赖性前列腺癌细胞的生长发展机制提供了新的研究思路。
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