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背景：肝癌是世界上第五大常见癌症，每年约有600，000新发病例，并且肝癌引起的死亡率在所有癌症中占第三位。临床上，大多数患者被诊断时就已经处于晚期，这致使以肝切除为主的手术治疗仅适合于不到10％的病人，大对数患者的平均生存时间约为6个月。因此，医学界普遍认为建立以手术治疗为基础的综合治疗仍是改善患者生存率的关键，而改善化疗的效果被列为重中之重。令人遗憾的是，目前针对肝癌的化疗效果十分不理想，作为一线的阿霉素对肝癌的有效率仅约为20％，且副作用极强，同时很快的产生多药耐药，目前的常规化疗药物如：阿霉素、顺铂、氟尿嘧啶、三氧化二砷等无论是单药或是联合用药并不能够引起具有统计学意义的延长肝癌患者的生存时间，因此，找到有效的肝癌治疗药物或是治疗方案具有非常重要的临床意义。这就使得更多的科学家们将目光投向了副作用中草药。作为咖喱主要成分的姜黄素就是一个很好的发现，研究表明它对多种肿瘤细胞均有杀伤作用，并且对人体的毒副作用微乎其微，成为了近年来研究的重点。但是，人们逐渐发现，姜黄素的抗肿瘤性能略弱，且胃肠道吸收能力差，应用价值不高。Brian K.Adams等人在2004年根据姜黄素的分子结构制造出了100余种姜黄素的类似物，结果这些类似物大都展现出了抗肿瘤作用，其中最为突出的是EF24，其经过美国国立癌症研究所的60个恶性肿瘤细胞系筛查，对大多数恶性肿瘤细胞系都有明显的抑制作用，其效果至少是姜黄素的20余倍，且对正常人体细胞无明显毒副作用和姜黄素一样。基于以上理论基础，我们将EF24应用于肝癌的治疗，从体内和体外两方面观察EF24对肝癌细胞的杀伤效果，探讨EF24的作用机制，必要时将EF24与其他化疗药物联合应用，以期待找到更有效的治疗肝癌的化疗药物或是化疗方案，最终促进肝癌综合治疗的效果。 目的：本实验拟定从细胞实验与动物实验两方面出发，观察姜黄素类似物EF24对于人肝癌细胞及裸鼠移植瘤的生长抑制、诱导凋亡、周期抑制等作用，并且进一步探索EF24抑制肝癌细胞生长的作用机制，进一步将EF24与肝癌治疗的常用化疗药物阿霉素与吉西他滨联合治疗肝癌，观察联合治疗的效果。 方法：(1)利用CCK-8试剂盒测定不同剂量组的EF24对肝癌细胞系HepG2，Huh7，Hep3B，PLC/PRF/5以及SK-HEP-5增殖能力的影响；(2)流式细胞仪观察不同剂量组EF24作用于肝癌细胞后的细胞周期分布状况；(3)利用流式细胞仪AnnexinV/PI双染技术，测定不同剂量组的EF24作用于肝癌细胞后的细胞凋亡情况；(4)利用Western blot检测不同剂量组的EF24作用于肝癌癌细胞48小时后对细胞周期及凋亡相关蛋白和对NF-κB信号通路蛋白表达水平的影响；(5)利用CCK-8，流式及western blotting等检测EF24对阿霉素及吉西他滨治疗肝癌的增敏效果及具体的分子生物学机制；(7)利用(BALB/c-nu/nu)裸鼠建立荷瘤模型检测EF24在体内的抑瘤效果，裸鼠移植瘤建立后定期应用小动物活体成像仪测量移植瘤的体积，利用免疫组化检测肿瘤细胞的增殖，凋亡。 结果：(1)EF24对肝癌细胞系HepG2，Huh7，Hep3B，PLC/PRF/5以及SK-HEP-5增殖有明显的抑制作用，而且呈剂量依赖性；(2)EF24可以诱导肝癌细胞的G2/M期细胞周期阻滞，而且伴随着细胞周期蛋白cyclin B1，p-cdc2(Thr161)以及p-cdc2(Tyr15)的改变；(3)EF24可以诱导肝癌细胞剂量依赖性的凋亡，而且该凋亡与caspase-3，-9的激活以及PARP的裂解有关。(4)EF24可以引起NF-κB信号通路核心蛋白p65的细胞核转移及与靶DNA的结合，western blotting还表明EF24可以引起NF-κB信号通路下游靶蛋白Bax，Bcl-2等的变化，进一步提示EF24的抗肿瘤作用与NF-κB信号通路有关。(5)EF24可以增敏肝癌癌对阿霉素与吉西他滨的敏感性，而且这种增敏与其抑制NF-κB信号通路上调产生的耐药有关；(6)EF24对裸鼠抑制瘤有明显的抑制效果，免疫组化与TUNEL表明对裸鼠的肿瘤抑制与抑制肿瘤细胞增殖及诱导肿瘤细胞凋亡密切相关，EF24与阿霉素、吉西他滨联合应用可以增敏阿霉素与吉西他滨的抗肝癌作用，抑制耐药的产生。 结论：新型姜黄素类似物EF24有明显的抗肝癌作用，其机制可能是通过抑制NF-κB信号通路的表达，诱导caspase信号通路的激活，最终导致细胞周期阻滞及细胞凋亡。EF24还可以增强肝癌细胞对传统化疗药物阿霉素与吉西他滨的敏感性，克服阿霉素与吉西他滨作用于肝癌细胞后NF-κB上调引起的耐药。该实验表明，EF24是一种很有潜力的抗肝癌药物，进一步的动物实验及临床前实验的进行也很有必要，该实验还为以NF-κB信号通路为靶点的肝癌治疗提供了新的证据和提示。