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目的:肺癌作为严重威胁人类健康的重大疾病,其发病率和死亡率均居恶性肿瘤之首,其主要原因在于传统的影像学和细胞学诊断还不能有效地检测出早期肺癌,多数患者一经发现已经转移。因此,寻求新的、有效的早期诊断技术对于降低肺癌死亡率具有非常重要的意义。本论文的研究工作期望通过血浆检测发展肺癌早期诊断的有效方法,为进一步探讨肺组织恶变的机制,寻找可能的癌症早期诊断标记物提供基础的研究资讯。方法:M细胞系是SV40-Large T抗原转化的人支气管上皮永生化细胞系,为研究细胞从正常到癌变过程中的遗传学的改变提供了良好的模型。我们利用M细胞系作为模型,在无血清培养集中培养后,收集分泌蛋白,经浓缩、除盐处理,进一步采用凝胶分离(SDS-PAGE)、高效液相色谱(HPLC)、二维高效液相色谱(2D-HPLC)与质谱(MS)联用技术对不同代数永生化支气管上皮细胞的分泌蛋白加以研究,说明肺癌发生过程中分泌蛋白分布的变化特征。结果:1.SDS-PAGE的实验结果表明,在MP49中,分泌蛋白的分子量分布较广,几乎在10-100kD范围内都有蛋白分布。相反,在MP188中,分泌蛋白主要集中在高分子量和低分子量范围内(>60kD,<10kD),而在10-50kD范围内蛋白含量较小。2.两个样品得到的酶解产物的疏水性质相似,但是在MP49的分泌蛋白中含有一些疏水性较强的肽段,而MP188的分泌蛋白中亲水性肽段较多。3.2D-HPLC/MS分析肽段的分布。在MP49的分泌蛋白中含有更多的肽段,肽段的疏水性质与被检测的离子的质荷比分布较为均匀。而MP188分泌蛋白的酶解产物则数量较少,主要得到一些质荷比相对较小的肽段。4.强阳离子交换色谱对酶解产物肽段分布加以评价,MP49中显酸性的肽段较多。5.采用质谱结合数据库对两个样品中的蛋白质加以鉴定。对MP49,可以确定120个蛋白;对MP188;可以确定85个蛋白。结论:1.采用SDS-PAGE和HPLC、2D-HPLC分离结合MS检测技术对不同代数的永生化支气管上皮细胞MP49和MP188的分泌蛋白分布加以研究。结果表明:随着代数越大,其蛋白质的分子量分布将逐渐向高分子量范围和低分子量范围过渡,而相对中等分子量的蛋白质逐渐减少。2.MP49对比MP188分泌蛋白的酶解产物,MP188中的亲水性肽段明显多于MP49,质谱鉴定也得到同样的结果。3.与SDS-PAGE相比,2D-HPLC/MS系统有助于发现一些低丰度的功能性蛋白质。4.在支气管上皮的恶性演变过程中寻找可能的癌症早期诊断蛋白质标记物,从亲水性较强的高分子量或低分子量蛋白质入手可能会得到更好的结果。