【摘 要】
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目的：糖尿病肾病(Diabetic Nephropathy,DN)是糖尿病最常见最严重的微血管并发症之一。糖尿病患者并发DN的死亡率是未并发者的30倍。由于早期症状不明显，未予重视或发现，相当多
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目的：糖尿病肾病(Diabetic Nephropathy,DN)是糖尿病最常见最严重的微血管并发症之一。糖尿病患者并发DN的死亡率是未并发者的30倍。由于早期症状不明显，未予重视或发现，相当多的DN患者在有明显蛋白尿或合并明显浮肿时才被觉察，而临床对于DN缺乏有效方法控制其发展。因此，提高对DN早期病变的认识并尽早采取有效措施，防止肾脏严重并发症至关重要。Periostin原名成骨细胞特异性因子2(osteoblast-specificfactor2, OSF-2),为成骨细胞及其前体细胞分泌产生的一种细胞外基质蛋白,特异表达于骨膜和牙周膜组织中。近年研究发现，periostin在肿瘤侵袭、骨折愈合、心肌重构、瘢痕修复等方面有重要作用。DN的病理特征是肾小球细胞外基质积聚导致的肾小球硬化，由此推测periostin作为一种重要的细胞外基质蛋白可能参与DN的发生、发展。本研究拟从组织及细胞两方面,应用生化指标检测、HE及Masson特殊染色法、免疫组织化学染色法,对比periostin在正常肾组织及糖尿病肾组织中的表达，揭示periostin参与DN发生、发展的作用机制，并通过蛋白质免疫印迹（Western Blot）法从蛋白质水平探讨periostin在糖尿病小鼠肾组织中的表达及转化生长因子-β1（transforming growth factor-β，TGF-β1）与periostin表达的关系，为临床早期发现、早期治疗DN提供理论依据。方法：左侧肾切除+腹腔STZ注射法建立CD-1小鼠糖尿病模型，检测血肌酐（serum creatinine，Scr）及24小时尿蛋白定量，取正常小鼠及DN小鼠肾组织，制作石蜡切片，分别用苏木素-伊红（hematoxylin-eosin，HE）及Masson特殊染色法，光镜观察肾组织的病理变化；另外采用免疫组织化学染色法检测肾组织periostin的表达，结果通过图像分析系统（Image-Pro Plus,IPP）进行半定量分析。体外培养小鼠肾小球系膜细胞（NC组），并给予高糖（HG组）及TGF-β1（T组）刺激，对高糖刺激小鼠系膜细胞进行TGF-β1中和抗体干预（AT组），分别收集干预4小时和12小时各组的系膜细胞，并提取细胞蛋白，采用Western Blot检测各组periostin的表达，结果通过ImageJ图像分析系统分析各组条带的积分光密度（Integrated option density，IOD）值，并以β-actin的IOD值作为标准对照，各组蛋白的IOD值与其相比，对比值进行统计学分析。得出数据采用均数±标准差(x±S)表示，Levene法检验方差齐性，两组间比较采用两独立样本t检验，多组间比较采用单因素方差分析，分析应用SPSS13.0统计分析软件处理，以P＜0.05为具有统计学意义。结果：糖尿病组小鼠的24小时尿蛋白、Scr较正常对照组明显升高（P＜0.05）；光镜观察两组肾组织的HE、Masson染色表明，糖尿病组肾组织有明显病变；肾脏免疫组织化学染色结果显示糖尿病组肾组织的periostin表达水平明显提高（P＜0.05）。高糖及TGF-β1刺激系膜细胞可促进periostin的表达，且刺激4小时较12小时组表达增强，而给予TGF-β1中和抗体后periostin表达下降（P＜0.05）。结论：高糖环境下，肾脏periostin的表达水平提高，且与肾脏病变及尿蛋白成正相关。Periostin的表达与TGF-β1有关，TGF-β1中和抗体可抑制periostin的表达。
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