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本文在查阅大量文献的基础上,结合本实验室条件,采用共振光散射技术研究聚阳离子与DNA的相互作用。聚阳离子自身的共振光散射信号较弱,但与核酸作用后,共振光散射信号大大增强,并且共振光强度的增加与DNA的浓度成线性关系。以此为基础建立了测定微量DNA的新方法。同时还应用红外光谱、紫外光谱来研究聚阳离子与DNA的作用方式。实验分为四部分:
1.利用共振光散射技术研究三嵌段共聚物PLL-PEG-PLL与DNA的相互作用将阳离子三嵌段共聚物PLL-PEG-PLL作为共振光散射探针来测定微量DNA。在优化条件下,DNA线性范围为0.0656-6.56 μg mL<'-1>,检测限(3σ)为0.412 ng mL<'-1>。该方法快速、准确、简单。同时应用紫外、红外等手段来研究PLL-PEG-PLL与DNA的相互作用。结果表明在反应过程中由于DNA的微环境发生改变导致DNA的构象发生变化。
2.合成聚阳离子PMBDAC,并作为共振光散射探针测定微量DNA合成了聚甲基丙烯酰氧乙基苄基二甲基氯化铵(PMBDAC)。PMBDAC自身的共振光散射信号较弱,但与核酸作用后,共振光散射信号大大增强。并且共振光强度的增加与DNA的浓度成线性关系,以此为基础建立了以PMBDAC为共振光散射探针,利用共振光散射技术测定DNA的新方法。DNA浓度的线性范围为1.70×10<'-8>~4.42×10<'-6>mol L<'-1>检测限(3σ)为5.7×10<'-9> mol L<'-1>。此方法简单、准确、快速,且成功用于合成样品的测定。
3.合成聚阳离子(P(AM-DMB)),研究P(AM-DMB)与DNA的相互作用合成丙烯酰胺—甲基丙烯酰氧乙基丁基二甲基氯化铵共聚物(P(AM-DMB))。利用RLS、UV、FT-IR等方法研究此聚阳离子与DNA的相互作用。结果表明在反应过程中由于DNA的微环境发生改变导致DNA的构象发生变化。P(AM-DMB)与DNA的结合常数是8.0×10<'3> L mol<'-1>。
4.合成聚倍半硅氧烷苯基氯化铵(阳离子POSS),并作为探针测定微量DNA合成阳离子POSS。并用阳离子POSS作为共振光散射探针来测定微量DNA。阳离子POSS与DNA相互作用形成的复合物使得其共振光散射信号大大增强,并且强度与DNA浓度成正比。在优化条件下,DNA 浓度在0.35~42.85μg mL<'-1> 范围内时,体系的共振光散射强度与DNA的浓度存在着线性关系。检测限(3σ)为0.32 ng mL<'-1>。此方法准确、快速、灵敏度高、重现性好。