论文部分内容阅读
虫草多糖是虫草中的主要活性成分之一，本文主要对纯化的虫草菌胞外多糖免疫调节活性和抗氧化活性进行了研究。
第一部分虫草菌胞外多糖对免疫细胞的影响
目的：探讨经分离纯化后的虫草菌胞外多糖纯品EPS对体外培养的小鼠免疫细胞的影响，进一步证实虫草菌多糖的免疫调节功能。
方法：从发酵培养虫草菌的液体培养基中收集提取虫草菌胞外多糖，经离子交换纤维素柱和葡聚糖凝胶柱分离得到纯多糖EPS。采用中性红吞噬法检测EPS对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能的影响；MTT法检测EPS对小鼠脾淋巴细胞和胸腺淋巴细胞增殖能力的影响；RT—PCR法检测小鼠脾细胞和胸腺细胞表达TNF—α，IFN—γ，IL-2 mRNA的转录水平。
结果：虫草菌胞外多糖EPS对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬能力有提高作用，当浓度为100μg/mL时，作用24h和48h后均能显著提高巨噬细胞吞噬中性红的能力(24h，p＜0.01；48h，p＜0.05)。100 μg/mL EPS作用48h对小鼠脾淋巴细胞增殖能力具有显著促进作用(p＜0.05)；EPS促进小鼠脾细胞TNF—αmRNA的表达随EPS浓度提高而增强，随EPS作用时间延长而下降。EPS 50μg/mL作用2h、4h及100μg/mL作用8h、20h具有显著促进胸腺细胞表达TNF—α的作用。在100μg/mE作用4h，20h后能显著增加脾细胞IFN—γ mRNA的表达(p＜0.05)；EPS对胸腺细胞IFN—γmRNA的表达在100μg/mL作用8h和20h具有显著促进作用(8h，p＜0.01；20h，p＜0.05)。EPS对小鼠胸腺细胞IL-2 mRNA的表达具有促进作用，且随其作用时间和剂量而增强。
结论：虫草菌胞外多糖EPS对巨噬细胞吞噬功能有促进作用，对小鼠脾淋巴细胞和胸腺淋巴细胞的增殖促进能力不强。EPS能够显著促进脾细胞TNF—αmRNA的表达和胸腺细胞IL-2 mRNA的表达，与时间一剂量有相关性；对脾细胞和胸腺细胞IFN—γ mRNA的表达也有一定促进作用。总体来看，EPS具有刺激机体细胞免疫的功能。
第二部分虫草菌胞外多糖抗氧化作用的研究
目的：已有研究表明氧应激与多种疾病相关，如：心血管疾病，癌症，神经系统疾病，糖尿病等，并且参与衰老过程。中药冬虫夏草具有抗衰老、抗肿瘤、降血糖等多方面的作用，这些作用可能与冬虫夏草具有抗氧化活性相关。本实验室前期工作发现，虫草菌产生的胞外多糖提取物具有抗肿瘤和抗氧化作用，本文采用体外培养的方法探索纯化的虫草菌胞外多糖的抗氧化活性，拟进一步证实虫草菌多糖的抗氧化作用。
方法：建立H2O2诱导的PC12细胞氧化损伤模型；MTT法检测虫草菌胞外多糖EPS对H2O2损伤的PC12细胞活力的影响；比色法测定PC12细胞内MDA含量及SOD、CAT活力。
结果：选择200μM/H2O2作用于PC12细胞1h作为建立细胞氧化损伤模型的条件；虫草菌胞外多糖EPS能显著提高氧化损伤后细胞的存活率(50 μg/mL，p＜0.05；200μg/mL，p＜0.05；400μg/mL，p＜0.001)。H2O2损伤的PC12细胞内MDA含量显著升高(p＜0.001)，而给与EPS可以降低H2O2诱导的MDA的产生；H2O2损伤模型组SOD酶活力显著下降(p＜0.001)，而EPS能提高并恢复SOD酶活力；EPS组对CAT酶活力没有明显影响。
结论：EPS对H2O2诱导损伤的PC12细胞具有保护作用，其机制可能是降低细胞内过氧化产物的含量，并提高抗氧化酶SOD的活力。