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目的:通过原代培养眼眶前脂肪细胞，诱导分化为成熟脂肪细胞，研究平目汤促进眼眶脂肪细胞凋亡的作用及分子机制，探讨平目汤治疗Graves眼病发挥益气温阳化痰祛瘀药效的可能作用靶点。 方法:经眼眶减压术获得Graves眼病患者眼眶球后脂肪组织，共4例4只眼。通过组织块法对人眼眶前脂肪细胞进行分离和培养，观察细胞的形态，采用间接免疫荧光技术进行鉴定。诱导前脂肪细胞分化为成熟脂肪细胞，油红O染色鉴定。制备平目汤含药血清，配成终浓度分别为5％、10％、20％的平目汤低、中、高剂量组。油红O染色观察平目汤对前脂肪细胞诱导分化的影响;MTT法检测平目汤对眼眶前脂肪细胞增殖活性的影响;流式细胞术测定平目汤对眼眶成熟脂肪细胞凋亡率的影响;Real Time-PCR(RT-PCR)检测平目汤对眼眶成熟脂肪细胞fas、fas L、Chop和Capase-4 m RNA表达的影响;Western blot检测平目汤对眼眶成熟脂肪细胞fas、fas L、Chop及Capase-4蛋白表达的影响。 结果: 1.采用组织块法进行眼眶前脂肪细胞的原代培养，培养第4d即见细胞从组织块边缘爬出，成功培养出细胞，细胞呈梭形，增殖旺盛，经间接免疫荧光检测证实为前脂肪细胞，细胞可分化为成熟脂肪细胞。 2.油红O染色结果显示，平目汤低、中、高剂量组可明显抑制前脂肪细胞分化为成熟脂肪细胞，平目汤各组所含红色“戒环”样脂滴数目较空白对照组及地塞米松组明显减少。 3.MTT结果显示，平目汤各组均可降低前脂肪细胞增殖活性，其中组间比较作用最为显著的是平目汤中剂量组。平目汤中剂量组作用48 h后OD值较空白对照组降低，随着时间的延长平目汤中剂量组OD值进一步降低，至96 h时最低，与各组比较差异均有统计学意义。 4.流式细胞术结果表明，与空白对照组比较，平目汤各组细胞凋亡率均升高，其中组间比较以平目汤中剂量组早期凋亡率和总凋亡率最高，其次为平目汤低剂量组。 5.荧光定量RT-PCR结果显示:平目汤各组对眼眶脂肪细胞的fas、fas L mRNA的相对表达量较空白对照组均有一定程度的升高，其中平目汤中剂量组fas mRNA表达水平与空白对照组比较差异有统计学意义，平目汤各组fas L、Chop、Capase-4 mRNA的相对表达量与空白对照组比较差异有统计学意义。 6.Western blot结果显示，与空白对照组相比，除地塞米松组外，各组Fas、Fas L蛋白表达均上调，差异有统计学意义，其中Fas蛋白表达以平目汤中剂量组最高，其次为平目汤低剂量组，Fas L蛋白表达以平目汤高剂量组最高，其次为平目汤中剂量组，但二者比较差异无统计学意义。与空白对照组相比，除地塞米松组外，平目汤各组Chop、Capase4蛋白表达均上调，差异有统计学意义，其中平目汤各组组间比较Chop蛋白表达以高剂量组最高，其次为中剂量组;Capase4蛋白表达以平目汤中剂量组最高，其次为平目汤低剂量组。 结论:平目汤使眼眶前脂肪细胞的增殖受到抑制，使前脂肪细胞向脂肪细胞的分化能力降低，通过死亡受体途径和内质网途径诱导fas、fas L、Chop、Capase4活化，促进成熟脂肪细胞凋亡，进而减少眼眶脂肪细胞积聚，从而发挥治疗效果。