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组织型纤溶酶原激活剂(t-PA)是一种具有广阔应用价值和经济价值的蛋白质。本文利用理性设计得到的t-PA特异性肽配基QDES对猪心组织中的t-PA进行了亲和色谱纯化。
通过碳二亚胺反应将四肽配基QDES固定在商品介质EAH Sepharose 4B上制备出了配基固定化密度为5μmol/ml的亲和吸附介质，并利用亲和色谱柱考察了其吸附蛋白质特性。通过对不同蛋白质(α-淀粉酶、溶菌酶、胰岛素)的亲和吸附实验发现α-淀粉酶和溶菌酶与亲和柱都不存在特异性亲和吸附而胰岛素与亲和柱却存在较高的亲和吸附作用。由于胰岛素与t-PA具有相似的亲和位点，因此认为固定化四肽配基亲和色谱对t-PA也存在特异性亲和吸附作用。
为了考察固定化四肽亲和柱对t-PA的亲和纯化效果，利用新鲜猪心组织制备了丙酮粉，并经过两次交替抽提和盐析后，获得了t-PA粗提液。用Bradford法测定了粗提液中蛋白质的含量，用纤维蛋白板溶圈法测定了粗提液中的t-PA活性，计算得出：1kg猪心组织中可得丙酮粉159g；经抽提、盐析后获得的t-PA粗提液的质量收率为35.12mg/100g丙酮粉；粗提液中t-PA比活性为34037 IU/mg。
利用亲和柱对t-PA粗提液进行了亲和色谱分离。通过电泳检测发现，经一步亲和纯化后产品中t-PA纯度即可达91％，比活为278110IU/mg，纯化了8倍，计算其收率为1.3mg t-PA/kg猪心。对吸附的t-PA进行不同条件下的洗脱后发现，t-PA与亲和介质的吸附主要是由t-PA与配基间的静电作用引起的，疏水作用贡献很小。同时，不同pH值下的吸附结果也证实了静电作用是亲和吸附中的主要因素。这一结论与理性设计所得结果相一致。
通过上述结果证明，利用理性设计的特异性亲和肽配基能够快捷、有效的从猪心组织中分离纯化t-PA。