根癌农杆菌介导香蕉(Musaspp.)基因转化的研究

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以巴西香蕉(Musa、AAA,Cavedishsubgroupcv.Brazil)、广粉1号(MusaABB,cv.Pisangawak)和大蕉(MusaABB,cv.Dajao)试管苗的茎段薄切作为转化受体,初步建立了根癌农杆菌介导外源基因转化香蕉的体系,还研究了不同启动子对香蕉基因转化的影响.利用薄片培养技术建立了适合于果用香蕉(AAA)、粉蕉(ABB)和大蕉(ABB)的高频再生体系.通过测定GUS基因的瞬时表达率,对影响根癌农杆菌介导的香蕉基因转化早期主要因素进行了研究.另外还研究启动子对香蕉基因转化的影响.首先构建了三个植物表达载体.为了实现转化的目标,得到真正的转基因植株,研究外源基因在香蕉中的稳定表达,该论文以该实验室已构建的Ptew2402(含NPTⅡ抗性基因、GUS报告基因和来自番茄的ACC氧化酶反义基因pTOM13)为植物表达载体,利用根癌农杆菌介导转化香蕉薄片外植体,经反复筛选得到巴西香蕉的5个抗性株系和广粉1号的7个抗性株系,转化频率分别为2.8﹪和4.2﹪.经PCR扩增、PCR-Southern杂交和Southern杂交检测,证实外源基因已整合进植物基因组.
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