四合木转录因子TmAP2-1基因的克隆及功能分析

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四合木(TetraenamongolicaMaxim)属于强旱生落叶小灌木,多生于草原化荒漠等生态条件极为恶劣的干旱地区,是优良的防风固沙植物。同时,四合木营养器官茎内含有大量的三脂酰甘油(triacylglycerols,TAG)。因此,研究四合木的抗逆性和营养器官中油脂储存的机理,将有助于揭示四合木适应恶劣生态环境的机制,并为四合木作为能源植物的开发和利用提供理论基础。   AP2/EREBP家族的转录因子在调控植物的生长发育、油脂合成和胁迫应答等方面起着重要的作用。本研究利用同源克隆结合RACE(rapid-amplificationofcDNAends)技术,首次从四合木中克隆了AP2/EREBP家族的基因,命名为TmAP2-1,并对其进行了深入的研究。序列分析表明,该基因的开放阅读框长度为1452bp,编码483个氨基酸,NCBI比对结果显示TmAP2-1有两个AP2/ERF结构域,属AP2/EREBP转录因子家族的AP2亚家族。亚细胞定位实验结果表明,TmAP2-1定位在细胞核中。酵母自激活实验结果发现该基因在酵母中没有激活活性。利用real-timePCR检测发现该基因在根、茎、叶等器官中都表达,且叶中表达量最高。同时,TmAP2-1还受到NaCl、低温、PEG(polyethyleneglycol)和ABA(abscisicacid)的强烈诱导,我们推测TmAP2-1可能参与了四合木的逆境胁迫响应。   为了研究TmAP2-1的生物学功能,我们首先构建了TmAP2-1的超表达载体,将其转入拟南芥中。研究发现,在正常生长条件下,转基因与野生型拟南芥的表型没有明显差异;但是拟南芥离体叶片的失水实验显示,TmAP2-1转基因拟南芥的叶片失水速率较野生型慢。在干旱和高盐胁迫条件下,转基因拟南芥的生长状况比野生型好;生理实验表明,和野生型相比,转基因拟南芥中H2O2和MDA的含量降低,抗氧化物酶的活性增强。同时我们还将该基因转入四合木愈伤组织中,结果发现过表达该基因能够降低油脂含量,同时提高可溶性糖含量。综上所述,我们推测TmAP2-1基因参与了四合木的糖、脂代谢以及逆境适应过程。
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