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研究背景口腔扁平苔藓(OLP)是一种T淋巴细胞介导的自身免疫性疾病,其病理过程包括抗原提呈,T细胞活化、增殖、迁移,角质形成细胞凋亡。B7-H1/PD-1信号途径作为一种对T细胞免疫应答的负性调控方式,在外周耐受和自身免疫性疾病中发挥着重要作用,其主要的生物学功能包括抑制T细胞的活化和增殖、调节细胞因子的表达和分泌、诱导细胞的凋亡。因此B7-H1/PD-1信号途径可能在OLPT细胞免疫应答中起着重要的负性调控作用。研究目的本研究旨在探讨B7-H1/PD-1信号在OLP患者免疫调节中的作用及机制。研究方法1.流式细胞术检测OLP患者外周血中T细胞表面B7-H1及PD-1的表达水平,RAE(网纹-萎缩-糜烂)计分系统评估OLP患者的疾病状态,分析B7-H1及PD-1的表达水平及与OLP严重程度的关系。2. ELISA测定OLP患者血清中γ-干扰素(IFN-γ)、白介素-2、4、10和可溶性PD-1的表达水平。3.阻断B7-H1/PD-1信号途径,观察B7-H1/PD-1信号途径对T-T细胞相互作用的影响。4.采用SYBR Green实时定量PCR技术检测角质形成细胞上TLR依赖性B7-H1mRNA表达水平,并探讨NF-κB通路、MEK/ERK通路及PI3K/mTOR通路对其的调节作用。5.分别共培养口腔角质形成细胞与Jurkat T细胞、OLP CD4+T细胞或OLP CD8+T细胞,研究B7-H1/PD-1信号途径对T细胞和角质形成细胞相互作用的影响。研究结果1.OLP患者外周血T细胞表面B7-H1及PD-1的表达水平显著高于对照组,且B7-H1的表达水平与疾病的严重程度呈正相关。2.OLP患者血清中Thl细胞因子IFN-y和IL-2增高,Th2细胞因子IL-4和IL-10降低,提示OLP患者血清中的Thl环境有利于T细胞上PD-1和B7-H1表达水平的上调。3.阻断B7-H1/PD-1信号通道后,T细胞的增殖、IFN-y和IL-2的分泌显著高于对照组。4. LPS/TLR4信号可诱导角质形成细胞上B7-H1的表达上调,且呈时间依赖性,R848活化TLR7/8信号后,角质形成细胞上B7-H1的表达变化不明显。5.阻断NF-κB途径或PI3K/mTOR途径可在一定程度上抑制角质形成细胞上LPS/TLR4信号诱导的B7-H1的上调,阻断MEK/ERK途径,角质形成细胞上B7-H1的表达无明显变化。6.在口腔角质形成细胞与Jurkat T细胞、OLP CD4+T细胞或OLP CD8+T细胞的共培养中,角质形成细胞上的B7-H1/PD-1信号途径可抑制Jurkat T细胞、OLPCD4+T细胞和OLP CD8+T细胞的增殖,促进其凋亡以及TNF-a的分泌,但对角质形成细胞的增殖和凋亡无明显影响。研究结论1.OLP外周血T细胞上异常的B7-H1/PD-1信号可能通过负性调控OLPT细胞来影响OLP的发生发展。2.OLP患者外周血T细胞表面B7-H1的表达水平可用来监测疾病的严重程度。3. LPS/TLR4信号可通过NF-κB途径或PI3K/mT0R途径调控角质形成细胞上B7-H1的表达。4.角质形成细胞上B7-H1/PD-1信号途径可通过直接抑制OLP CD4+T细胞的增殖和促进其凋亡,进而直接或间接地抑制OLP CD8+T细胞的增殖和促进其凋亡,最终在一定程度上引起OLP的免疫耐受,减少CD8+T细胞对角质形成细胞的损伤。5.针对B7-H1/PD-1信号途径各个环节的激动剂有可能成为治疗OLP的新方法。6.正常口腔角质形成细胞系和Jurkat T细胞的共培养可能为OLP细胞系模型的建立提供了一种新思路,有望为在细胞水平深入研究OLP发病机制提供便利和依据。