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二穗短柄草作为一种新型禾本科模式植物，其有效的遗传转化体系为进行功能基因组研究所必需。组织培养特性是影响遗传转化效率的主要因素。本研究比较了三种不同培养基对二穗短柄草幼胚组织培养特性的影响，发现添加2.5mg/L2,4-D的LS培养基较适合于胚性愈伤组织的诱导，添加0.2mg/L KT的LS培养基可以获得较高的植株再生率。利用该培养基，对二倍体二穗短柄草PI254867材料的71个单株进行组织培养特性研究，筛选出适合用于二穗短柄草遗传转化体系建立的单株PI254867-14和PI254867-22。此外，对分化不同时间段的再生植株进行了生根实验，发现在分化3或4周时进行生根效果最好。