红花注射液对兔脊髓缺血再灌注损伤保护作用的研究

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目的:观察兔脊髓缺血再灌注损伤后红花注射液对兔后肢功能、组织病理学、脊髓组织中Caspase-3及血清中丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)以及白细胞介素-8(IL-8)改变的影响,研究红花注射液后处理对神经细胞坏死、凋亡及脂质过氧化反应的影响,探讨红花注射液后处理在脊髓缺血再灌注损伤中的保护作用及其可能机制,从而为今后的治疗提供理论依据。   方法:采用改良Zivin法建立脊髓缺血再灌注模型。24只新西兰兔随机分为3组,每组8只,假手术组(C组),缺血再灌注组(I/R组),红花注射液后处理组(S组)。假手术组不阻断腹主动脉,仅实施麻醉及手术操作。缺血再灌注组阻断腹主动脉40分钟后开放灌注,红花注射液后处理组在阻断腹主动脉40分钟开放灌注后经耳缘静脉注射红花注射液2.0ml/kg,随后持续泵注至总量为5ml/kg,C组与I/P组用0.9%生理盐水5ml/kg替代。术后各组分别于再灌注0小时、4小时、12小时、24小时、48小时股静脉取血,测定血清中丙二醛(malondialdehyde,MDA)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)以及白细胞介素-8(interleukin-8,IL-8)浓度。再灌注4小时,12小时,24小时,48小时观察动物后肢活动并进行神经功能评分。手术各组分别于再灌注后48小时后取实验动物L2-5段脊髓行病理学检查,采用HE染色观察脊髓标本的一般病理学改变,TUNEL法染色观察脊髓标本的细胞凋亡情况,Western-blot检测脊髓组织中Caspase-3的表达。   结果:⑴I/R,S组在再灌注后均有不同程度的下肢瘫痪。S组于再灌注后各观察时间点后肢神经功能评分(改良Tarlov评分)均高于I/R组(P<0.05,P<0.01)。⑵组织病理学检查(HE染色)发现再灌注48h后S组脊髓神经细胞空泡变性范围、炎症反应均明显轻于I/R组,脊髓前角正常神经元计数S组均显著高于I/R组(P<0.05)。⑶TUNEL染色显示凋亡神经元计数I/R组明显多于S组,C组脊髓标本中无凋亡细胞显色。⑷Western-blot检测脊髓组织中Caspase-3的表达发现,C组无Caspase-3表达,I/R组Caspase-3表达量明显高于I/R组。⑸Elisa法检测血清指标发现,I/R组与S组比较,脊髓缺血再灌注后相应时间点血清SOD活性均较低(P<0.05),而MDA含量均增多(P<0.05)。⑹Elisa法检测脊髓缺血再灌注后各个时间点血清IL-8水平发现,I/R组IL-8水平均显著高于C组(P<0.05,P<0.01),而S组均明显低于IR组(P<0.05,P<0.01)。   结论:①红花注射液后处理对脊髓缺血再灌注损伤具有保护作用。其保护作用主要表现在两个方面,一是抑制神经细胞的凋亡,二是减少神经元的坏死。②红花注射液减轻脊髓缺血再灌注引起的神经损伤,机制可能与其能减轻脊髓神经细胞的脂质过氧化反应有关。③红花注射液抑制神经细胞凋亡的机制可能与其能够显著减少再灌注期间Caspase-3的表达水平有关。④红花注射液减少神经元坏死的机制可能与其能够显著降低再灌注期间IL-8的水平,从而减轻炎症反应有关。
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