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肾结石是一种临床常见疾病,结石的主要成份为草酸钙。现代医学认为尿液中草酸钙结晶的成核、生长、聚集及对肾小管上皮细胞的黏附在肾结石的形成过程中起重要作用。研究发现尿液中含有多种抑制草酸钙结晶形成的大分子物质,骨桥蛋白（osteopontin,OPN）是其中一种代表性的蛋白质。夏枯草是一种有效治疗尿石症的传统中草药,但其具体作用机制尚不清楚,在本研究中我们探讨了夏枯草不同提取物对草酸钙结晶形成的体外和体内影响,并研究夏枯草提取物对大鼠肾组织OPN表达的影响。目的:探讨中药夏枯草不同提取物体外抑制尿草酸钙结石形成的效应以及体内对大鼠尿草酸钙结石形成的影响;并研究夏枯草提取物对大鼠OPN表达的影响,初步探讨夏枯草抑制尿草酸钙结石形成的机制。方法:体外实验采用种晶技术检测不同浓度(10和20mg·ml-1)夏枯草水溶性提取物（C1、C2组）、50%甲醇提取物（D1、D2组）和100%甲醇提取物（E1、E2组）对体外一水草酸钙晶体生长的抑制指数。40只Wistar大鼠随机分为5组（每组8只）,采用乙二醇和氯化铵诱导的大鼠肾草酸钙结石模型进行试验研究。对照组（A组）、成石组（B组）、夏枯草水溶性提取物组（C组）、50%甲醇提取物组（D组）、100%甲醇提取物组（E组）,分别通过灌胃方式予一定剂量的夏枯草不同提取物。饲养4周后,检测各组大鼠血BUN、Cr,24h尿草酸（Ox）、Ca2+分泌量和肾组织Ca2+含量。镜下观察肾组织切片中草酸钙结晶及肾小管扩张情况,检测各组大鼠肾组织病理学改变和草酸钙结晶沉积情况,并采用原位杂交和逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）分别观察各组大鼠肾组织中OPN mRNA表达,免疫组织化学和蛋白质印迹（Western blotting）检测各组大鼠肾组织OPN蛋白的表达水平。结果:体外实验显示夏枯草不同提取液体外对草酸钙结晶的抑制影响随药物浓度增加,其对草酸钙结晶生长的抑制作用也增强,且组间差异具有统计学意义（P＜0.05）。在相同药物浓度条件下,夏枯草水提取物和50%甲醇提取物对草酸钙结晶生长的抑制作用较强,而100%甲醇提取组的抑制作用相对较低。动物实验显示A组大鼠血BUN、Cr明显低于其他各组,差别有显著性意义（P＜0.05）,各组间血Ca2+、P浓度则无明显差异;24h尿Ox、Ca2+分泌量各夏枯草实验组与B组无明显差异（P＞0.05）;C、D组肾组织Ca2+含量明显低于B组,差别有显著性意义（P＜0.05）。A组肾小管正常,B组肾小管腔可见大量成片草酸钙结晶存在,管腔明显扩张;C组肾小管腔可见散在草酸钙结晶存在,少数呈片状,管腔轻度扩张;D组肾小管腔仅见少许散在草酸钙结晶存在,管腔未见明显扩张;E组基本同B组。原位杂交显示OPN mRNA主要在肾近曲小管和远曲小管,亨利氏袢,和集合导管（主要髓袢升支）明显表达,而在皮质肾小球中则未能检测到OPN mRNA的表达。A组大鼠肾组织中仅肾脏髓质小部分亨利氏袢中检测到OPN mRNA的表达,与此相反在B组和D理组大鼠肾组织中则明显检测到OPN mRNA的表达,只是B组中OPNmRNA的表达强度相对弱于成石对照组。RT-PCR检测结果与原位杂交一致。免疫组化显示OPN蛋白在所有3组中均有表达,在肾近曲小管和远曲小管,亨利氏袢,和集合导管（主要髓袢升支）明显表达OPN蛋白,而在皮质肾小球中则未能检测到OPN蛋白的表达。在正常对照组中仅能检测到OPN蛋白的微弱表达。但是在B组大鼠肾组织中OPN表达则明显增强。D组大鼠肾组织中OPN表达强度低于成石对照组。Western blotting检测显示A组轻度表达OPN,而B组则显著表达,D组表达强度低于结石组。结论:夏枯草水提取物和50%甲醇提取物体外能够有效抑制尿草酸钙结石形成。体内实验表明夏枯草50%甲醇提取物能有效防止大鼠体内尿草酸钙结石形成。夏枯草50%甲醇提取物能有效抑制大鼠肾组织OPN的表达,减少肾组织草酸钙结晶的沉积,从而能有效抑制大鼠肾草酸钙结石的形成。