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秋华柳是一种分布于三峡河岸带地区的灌木,由于长期的周期性淹水胁迫,进化出较强的抗涝害能力,在低氧胁迫中具有较强的适应性。本研究分析秋华柳内生真菌多样性和分布特异性及其抗氧化活性。采集淹水前后中秋华柳根、茎、叶,在厌氧和有氧条件下采用组织培养法进行真菌分离,结合形态学和分子生物学对真菌进行种属鉴定,对不同生境、不同组织器官和不同培养条件下获得的真菌进行了多样性指数、均匀度指数和丰富度指数分析,初步分析了内生真菌分布特征,测定了内生真菌发酵液的总抗氧化活性、DPPH自由基清除率、铁氰化钾还原力,讨论了不同种属间总抗氧化活性的差异及总抗氧化活性与种属的分布特点。研究取得结果如下: 1.从不同生境下秋华柳根、茎、叶中分离共115株内生真菌,经形态学及分子生物学分析,鉴定为26属:曲霉属、青霉属、链格孢菌属、镰刀菌属、耙齿菌属、栓菌属、蜡孔菌属、烟管菌属、小鬼伞属、脉孢菌属、根霉属、隔孢伏革属、硬孔菌属、拟盘多毛孢属、刺盘孢属、伏革菌属、裂褶菌属、无柄盘菌属、柱顶孢霉、毛霉属、螺旋聚孢霉、拟茎点霉属、葡萄座腔菌属、茎点霉属、炭角菌属等,优势属为曲霉属、青霉属,分别占20%和26.95%,其次为链格孢菌属、镰刀菌属、耙齿菌属,占8.7%、5.22%、5.22%。 2.(1)内生真菌对秋华柳生境具有选择性,淹水前分离得到秋华柳内生真菌54株,归属15属,青霉属为优势属,占16.52%;淹水后分离得到秋华柳内生真菌61株,归属19属,优势属为曲霉属和青霉属,各占15.65%和10.43%。(2)秋华柳内生真菌表现出组织普遍性和专一性,曲霉属、青霉属、链格孢菌属、耙齿菌属、栓菌属在根、茎、叶组织中普遍存在;从秋华柳根部中分离到31株内生真菌,归属15属,青霉属为优势菌属,占7.83%;从秋华柳茎部分离到44株内生真菌,归属13属,曲霉属和青霉属优势属,分别占11.3%和8.7%;从秋华柳叶部分离到40株内生真菌,归属14属,优势属为青霉属,占10.43%。(3)不同培养条件下的菌株分布具有差异性,有氧条件下,共分离79株,归属15属,青霉属和曲霉属为优势属,且普遍分布各组织部位;厌氧条件下,共分离36株,归属19属。 3.秋华柳内生真菌多样性指数(H′)、丰富度指数(R)和均匀度指数(E)存在组织、生境、培养条件差异性:多样性指数(H′):淹水后秋华柳内生真菌(2.41)>淹水前秋华柳内生真菌(2.25),且淹水后根部最高(2.41);厌氧条件秋华柳内生真菌(2.72)>有氧条件秋华柳内生真菌(1.89),且厌氧条件下根部最高(2.14);根部(2.38)>叶部(2.04)>茎部(2.03)。丰富性指数(R):淹水后(4.38)>淹水前(3.76),且淹水后最高(3.69);厌氧条件下(5.02)>有氧条件下(3.20),且厌氧条件下最高(3.22);根部(4.07)>叶部(3.52)>茎部(3.17)。均匀度指数(E):淹水后(0.82)>淹水前(0.81),且淹水后根部最高(0.89);厌氧条件下(0.92)>有氧条件下(0.69),且厌氧条件下根部最高(0.97);根部(0.88)>茎部(0.79)>叶部(0.77)。 4.秋华柳内生真菌抗氧化活性分析:秋华柳内生真菌总抗氧化活性与生境及培养条件有关,秋华柳茎部分离到的内生真菌数量最多,且在有氧条件下、淹水前后茎部表现出较高的总抗氧化活性,叶部均表现出较低的总抗氧化活性;厌氧条件下,淹水前茎部和根部总抗氧化活性比淹水后的低,而在有氧条件下则结果刚好相反;淹水前后有氧条件下茎部内生真菌总抗氧化活性显著高于厌氧条件下; 5.秋华柳内生真菌的抗氧化能力与种属关系分析:有氧条件下:淹水前后秋华柳根茎叶中青霉属和曲霉属表现出较强的抗氧化活性,且茎部和叶部曲霉属抗氧化活性最高,淹水前根部青霉属抗氧化活性最高;厌氧条件下:淹水前后根茎叶中各属抗氧化活性存在差异性,其中淹水前茎部和叶部链格孢菌属抗氧化活性最高。