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MicroRNAs(miRNAs)对骨骼肌发育过程中起着关键的作用。之前的研究发现miR-128在骨骼肌中高表达，但其对骨骼肌发育的调节机制尚不明确。本研究通过生物信息学预测分析，发现miRNA-128可能结合到肌肉生长抑制素(Myostatin，MSTN)mRNA的编码区(Coding Domain Sequence，CDS)区，进而调控骨骼肌细胞的增殖与分化。我们利用C2C12成肌细胞为模型，分别将miRNA-128前体、抑制剂、mimics与阴性对照(NC)转染到C2C12细胞中，并运用5-乙炔基-2脱氧尿嘧啶核苷(5-ethynyl-2-deoxyuridine，EdU)细胞增殖检测、流式细胞术、定量PCR、免疫荧光和蛋白印迹等分子生物学技术，探讨了miRNA-128差异表达对MSTN的表达和对成肌细胞增殖与分化的影响;同时检测小鼠体内miRNA-128与MSTN在体内的表达模式，得到以下结果: 1.miRNA Stem-loop RT-PCR定量检测结果显示，miRNA-128的表达量随着小鼠日龄的增加以及C2C12成肌细胞的分化而显著升高。提示miRNA-128可能参与调控骨骼肌细胞的发育过程。 2.在C2C12细胞中过表达miRNA-128降低了MSTN蛋白的表达水平;转染miRNA-128的抑制剂升高了MSTN的蛋白水平，但是miRNA-128差异表达对MSTN的mRNA水平没有影响。这些结果表明miRNA-128差异表达影响了MSTN蛋白的表达。 3.构建包含miRNA-128与MSTN结合的种子序列及其突变的质粒，将重组质粒与miRNA-128的mimics共同转染到C2C12细胞与HEK293细胞中;用双荧光报告检测试剂盒检测细胞荧光素酶活性，结果发现:与转染带有突变序列质粒的细胞相比，miRNA-128降低了MSTN重组质粒的荧光素酶活性，提示MSTN是miRNA-128的靶基因。 4.荧光定量PCR检测发现:当miRNA-128在C2C12成肌细胞中过表达后，细胞中成肌标记基因My f5、MyoG、Pax3/7的表达量显著降低;当C2C12成肌细胞中miRNA-128表达受到抑制时，细胞中成肌标记基因MyoG、Myf5、Pax3/7的表达量显著升高。结果暗示miRNA-128差异表达会影响C2C12成肌细胞的增殖与分化。 5.通过EdU细胞增殖试验检测发现:当miRNA-128在C2C12成肌细胞中表达时，显著降低了C2C12成肌细胞的增殖;流式细胞仪分析发现:G1期细胞数目显著增多，说明miRNA-128过表达能够将成肌的细胞周期阻滞在G1期，从而抑制成肌细胞增殖。另一方面，当miRNA-128的表达受到抑制时，则促进了C2C12成肌细胞增殖。 6.当miRNA-128在C2C12成肌细胞中过表达时诱导其分化，通过免疫荧光检测发现:C2C12成肌细胞中成肌标记基因肌球蛋白重链(myosin heavy chain，MyHC)的表达量显著升高;荧光定量PCR检测发现:肌细胞生成素(myogenin，MyoG)与MyHC基因的mRNA水平增加了;Western blot结果显示:MyHC蛋白的表达量显著升高。结果表明:miRNA-128过表达能够促进C2C12成肌细胞分化，而当miRNA-128的表达受到抑制时，成肌标记基因MyHC、MyoG的表达降低了，说明成肌细胞分化受到抑制。 综上所述，在骨骼肌细胞的发育过程中，miRNA-128通过对其靶基因MSTN表达的调控来影响骨骼肌细胞的增殖与分化。