Cox-2L启动子及SSTR基因重组腺病毒载体的构建和鉴定

来源 :大连医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:baikubk258
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本文研究目的:构建环氧合酶-2L启动子(Cox-2L)及2型生长抑素受体(SSTR2)基因重组腺病毒载体,以研究SSTR2重新表达及腺病毒感染对胰腺癌细胞的影响。 研究方法:用RT-PCR法从人正常胰腺组织中调取SSTR2基因,以HL60细胞基因组DNA为模板,以PCR法调取Cox-2L基因,以SSTR2及Cox-2L基因片段为模板,以PCR法扩增Cox-2L-SSTR2融合基因并连入Takara公司pAxcwit腺病毒载体中,以电穿孔法转化E.Coli后挑选阳性克隆进行PCR及酶切鉴定。以pAxcwit-Cox-2L-SSTR2转染HEK293细胞获得重组腺病毒颗粒,进行PCR、酶切鉴定及病毒滴度测定。 研究结果:调取并连接后的基因片段经测序证实为Cox-2L、SSTR2及Cox-2L-SSTR2融合基因,Cox-2L-SSTR2基因片段及PolyA克隆入T载体,经酶切并测序证实PMD18-T-Cox-2L-SSTR2-PolyA构建成功。pAxcwit-Cox-2L-SSTR2-PolyA经酶切及PCR鉴定,Cox-2L-SSTR2-PolyA融合基因正确连腺病毒载体。 研究结论:成功构建了Cox-2L-SSTR2基因重组腺病毒载体,为进一步研究SSTR2在胰腺癌细胞中的表达及作用奠定了基础。
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本文研究目的:应用免疫组织化学SP法,从分子蛋白水平检测SSR2、SSR5在人胰腺癌患者组织中的表达情况,并结合临床资料进行相关分析,为临床应用生长抑素类似物治疗胰腺癌提供理论依据。研究方法:收集我院1997年12月至2005年5月术后病理确诊为胰腺癌的患者癌组织和我院同期病理诊断为胆管下段癌未侵及胰腺的患者的胰腺组织各60例,手术切除后标本经10﹪的福尔马林固定、脱水,常规石蜡包埋,4um厚连续
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