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以人5型腺病毒(HAd5)为主的重组腺病毒在基因治疗和疫苗研发中广泛应用，但人群中普遍存在的针对载体自身的中和抗体限制了HAd5的多次应用。本研究在构建并成功获得本研究所需的重组不同外源基因的HAd5基础上，在我国小样本人群中调查了针对HAd5的中和抗体的预存情况。结果显示有71.74％的人检测到针对HAd5中和抗体，并且男性的阳性率比女性稍高。可见腺病毒载体在人群中，特别是高中和抗体滴度的人群中应用难以推广。本研究以中国猕猴为动物模型，采用HAd5为载体在体外转导外源基因进入外周血单个核细胞(PBMC)后自体回输以避免机体中高滴度的中和抗体中和腺病毒载体疫苗。
首先对HAd5体外感染PBMC的效率进行优化，证实HAd5主要感染其中的单核细胞群；通过施加离心力(1000g)在室温下可显著促进感染效率。在此基础上使用携带经密码子优化的高致病性禽流感H5N1的血凝素基因的重组腺病毒HAd5-hu04HA以离心的方式在体外感染从高HAd5的中国猕猴外周血中分离的单核细胞，以静脉注射、皮下/肌肉联合注射的方式自体回输这些细胞，并与直接肌肉注射HAd5-hu04HA病毒颗粒进行比较。结果显示静脉回输细胞的方式与直接肌肉注射HAd5-hu04HA病毒颗粒可检测到水平相近的04HA特异的细胞免疫和体液免疫，但静脉回输细胞的方式诱导产生的04HA特异的细胞免疫更为迅速。
本研究探讨一种简便而又有效的提升HAd5载体性能的免疫方式，为疾病治疗“个体化”尤其对在高HAd5中和抗体人群中再次使用HAd5载体具有重要意义。