16SrRNA/DNA荧光定量PCR技术检测早产儿肠道菌群的变化

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目的: (1)研究和分析早产儿肠道菌群的动态变化并与同龄正常足月新生儿进行比较; (2)探讨16SrRNA/DNA荧光定量PER技术在临床细菌定量分析中的实用性和可行性。 方法: (1)分别提取40例早产儿和40例正常足月新生儿在生后第1天、第4天、第7天粪便标本的目标细菌DNA,测定和比较两组新生儿粪便标本细菌的OD260值: (2)采用16SrRNA/DNA荧光定量PCR技术对早产儿组和足月儿组粪便标本中的双歧杆菌和大肠杆菌进行定量分析和比较。 结果: (1)粪便标本中细菌的OD260值分别为:早产儿组生后第1天377.20±93.40ng/μl,第4天560.10±93.56ng/μl,第7天710.00±94.02ng/μl足月儿组生后第1天476.53±83.52ng/μl,第4天825.38±95.84ng/μl,第7天952.73±95.57ng/μl。两组间以及生后不同日龄间相比,均有显著差异(P<0.05); (2)粪便标本中双歧杆菌数量的对数值(检出率)分别为:早产儿组生后第1天6.28±0.44Iog10VFU/g(45%),第4天6.97±0.48log10CFU/g(75%),第7天7.34±0.49log10CFU/g(90%):足月儿组生后第1天6.52±0.52log10CFU/g(75%),第4天8.30±0.48log10CFU/g(1005),第7天8.89±0.48log10CFU/g(100%)。两组间以及生后不同日龄间相比,粪便标本中双歧杆菌数量的对数值均有显著差异(P<0.05);生后第1天、第4天两组间粪便标本中双歧杆菌的检出率有显著差异(P<0.05),早产儿组粪便标本中双歧杆菌的检出率低:生后不同日龄间粪便标本中双歧杆菌的检出率亦有显著差异(P<0.05),出生第1天时粪便标本双歧杆菌的检出率明显低于出生第4天、第7天; (3)粪便标本中大肠杆菌数量的对数值(检出率)分别为:早产儿组生后第1天7.28±0.62log10CFU/g(62.5%),生后第4天8.66±0.60log10CFU/g(100%),生后第7天8.18±0.59log10CFU/g(100%);足月儿组生后第1天7.76±0.51log10CFU/g(75%),第4天8.27±0.52log10CFU/g(100%),第7天8.61±0.53log10CFU/g(100%)。两组间以及生后不同日龄间相比,粪便标本中大肠杆菌数量的对数值均有显著差异(P<0.05);生后不同日龄间粪便标本中大肠杆菌的检出率亦有显著差异(P<0.05),出生第1天时粪便标本大肠杆菌的检出率明显低于出生第4天、第7天;但两组间大肠杆菌的检出率差异无统计学意义(P=0.228)。 结论: (1)新生儿早期肠道细菌总数、大肠杆菌和双歧杆菌的数量和检出率随日龄增加而呈增多趋势; (2)早产儿肠道菌群与同龄正常足月新生儿比较有显著差异,肠道中细菌总数和双歧杆菌的数量及检出率都有明显减少,早产儿肠道正常菌群的定植明显晚于足月儿; (3)16SrRNA/DNA荧光定量PCR技术在临床细菌定量分析中切实可行。
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