论文部分内容阅读
植物病毒侵染寄主,需要克服寄主细胞胞间连丝(Plasmodesmata,PD)的限制,进行胞间运动,从而系统侵染寄主。为了克服PD屏障,植物病毒通过编码运动蛋白来介导病毒通过PD。辣椒脉黄病毒(Pepper vein yellows virus, PeVYV)是正义单链RNA病毒,属于黄症病毒科(Luteoviridae )马铃薯卷叶病毒属(Polerovirus)。该病毒能够通过蚜虫和嫁接进行传毒,受侵染寄主会出现叶脉黄化、新叶簇生等症状,严重影响辣椒等茄科作物的产量和品质。研究PeVYV编码的运动蛋白及其功能,可为分析PeVYV的致病性提供科学依据,也可为科学评估PeVYV对茄科经济作物的潜在威胁提供理论基础。
辣椒脉黄病毒ORF4编码的一个大小为17.5KDa的蛋白,P4蛋白的结构域分析表明,在117-138aa区段有一个跨膜结构域。P4蛋白亚细胞定位结果表明,P4蛋白,与PD的标志蛋白PDLP8共定位,形成不连续的黄色荧光点。删去或A替代P4蛋白的117-138aa跨膜结构域,?P4117-138蛋白(缺失突变子)和?P4AAA117-138(A替代突变子)虽定位于细胞膜,但两个突变子均不能与PDLP8蛋白共定位。研究结果表明,P4蛋白的117-138aa跨膜结构域是P4蛋白定位于PD的关键结构域。
P4蛋白介导植物病毒胞间运动研究表明,P4蛋白能够互补运动蛋白缺失突变黄瓜花叶病毒(CMV ?3a)进行胞间运动,92%的病毒运动到邻近细胞;?P4AAA117-138驱动仅16%CMV?3a侵染邻近细胞;而?P4117-138蛋白完全失去互补CMV?3a进行胞间运动的能力。
利用免疫共沉淀(Co-immunoprecipitation,Co-IP)结合液相色谱-质谱/质谱(Liquid-chromatography Mass/Mass,LC-MS/MS),筛选鉴定与P4蛋白及其跨膜结构域突变子互作的寄主蛋白。筛选到与P4蛋白可能直接互作的寄主蛋白16个,主要参与内质网结合(ER binding)、能量代谢、丝裂原活化激酶途径、自噬体途径、DNA甲基化途径等;两个突变子可能直接互作的寄主蛋白14个,不能与丝裂原活化激酶途径、自噬体途径的2个蛋白互作。P4蛋白不但介导病毒胞间运动,还可能参与调控病毒复制和寄主抗性等多重功能。
辣椒脉黄病毒ORF4编码的一个大小为17.5KDa的蛋白,P4蛋白的结构域分析表明,在117-138aa区段有一个跨膜结构域。P4蛋白亚细胞定位结果表明,P4蛋白,与PD的标志蛋白PDLP8共定位,形成不连续的黄色荧光点。删去或A替代P4蛋白的117-138aa跨膜结构域,?P4117-138蛋白(缺失突变子)和?P4AAA117-138(A替代突变子)虽定位于细胞膜,但两个突变子均不能与PDLP8蛋白共定位。研究结果表明,P4蛋白的117-138aa跨膜结构域是P4蛋白定位于PD的关键结构域。
P4蛋白介导植物病毒胞间运动研究表明,P4蛋白能够互补运动蛋白缺失突变黄瓜花叶病毒(CMV ?3a)进行胞间运动,92%的病毒运动到邻近细胞;?P4AAA117-138驱动仅16%CMV?3a侵染邻近细胞;而?P4117-138蛋白完全失去互补CMV?3a进行胞间运动的能力。
利用免疫共沉淀(Co-immunoprecipitation,Co-IP)结合液相色谱-质谱/质谱(Liquid-chromatography Mass/Mass,LC-MS/MS),筛选鉴定与P4蛋白及其跨膜结构域突变子互作的寄主蛋白。筛选到与P4蛋白可能直接互作的寄主蛋白16个,主要参与内质网结合(ER binding)、能量代谢、丝裂原活化激酶途径、自噬体途径、DNA甲基化途径等;两个突变子可能直接互作的寄主蛋白14个,不能与丝裂原活化激酶途径、自噬体途径的2个蛋白互作。P4蛋白不但介导病毒胞间运动,还可能参与调控病毒复制和寄主抗性等多重功能。