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研究背景及目的:Caerin多肽是我们研究团队从澳大利亚沿海雨林地区的树蛙（Litoria属）皮肤腺体分泌物中鉴定出来的一种宿主防御多肽（Caerin多肽已申请国际专利）,能抑制多种肿瘤细胞的增殖生长。甲状腺癌是内分泌系统中最常见的恶性肿瘤,其中分化型甲状腺癌发病率较高,碘难治型甲状腺癌和甲状腺未分化癌是目前临床面临的棘手问题。因此,我们研究Caerin多肽对两种人甲状腺癌细胞株（人甲状腺未分化癌CAL-62细胞株及人甲状腺乳头状癌B-CPAP细胞株）是否具有肿瘤细胞毒性作用?能否被细胞摄取?放射性核素131I能否稳定标记在Caerin多肽及131I-Caerin在CAL-62及B-CPAP细胞的体内外生物学活性评价?以初步探讨131I-Caerin在甲状腺癌中的潜在治疗价值。研究方法:第一部分Caerin多肽在人甲状腺癌的细胞水平研究。采用CCK-8法,研究Caerin多肽对CAL-62及B-CPAP细胞的细胞增殖毒性作用,并研究其半抑制浓度(50 Inhibiting Concentration,IC50)。通过激光共聚焦显微镜成像,观察Caerin多肽能否被CAL-62及B-CPAP细胞所摄取及其富集的位置。第二部分131I-Caerin的制备及基本性质检测。采用氯胺-T（Chloramine-T,Ch-T）直接标记法进行放射性核素131I标记Caerin多肽,通过纸层析法检测其标记率。标记完成后测定131I-Caerin的基本理化性质,包括pH值、放射性浓度、脂水分配系数及体外稳定性等情况。第三部分131I-Caerin在人甲状腺癌的体内外生物学评价。131I-Caerin的生物学评价包括细胞水平及动物水平的研究。细胞水平研究中,通过细胞摄取及洗脱实验,研究131I-Caerin在CAL-62及B-CPAP细胞中的结合及滞留能力;通过CCK-8法,研究131I-Caerin对CAL-62及B-CPAP细胞的细胞增殖毒性作用。在动物水平中,首先制备CAL-62荷瘤裸鼠肿瘤模型,通过瘤体内注射的方式,研究各组荷瘤裸鼠的体重及瘤体体积变化,至治疗结束后,完整解剖分离出肿瘤组织进行称重对比,同时将肿瘤组织继进行HE染色观察。研究结果:第一部分Caerin多肽在人甲状腺癌的细胞水平研究。通过CCK-8实验结果显示,Caerin多肽对CAL-62及B-CPAP细胞具有一定的细胞毒性作用,IC50分别为:9.856μg/mL、4.038μg/mL,并且随着多肽浓度的增加细胞毒性作用逐渐增强。通过激光共聚焦显微镜成像观察,Caerin多肽能被CAL-62及B-CPAP细胞摄取,并且主要富集在细胞质中。第二部分131I-Caerin的制备及基本性质检测。Caerin多肽可通过氯胺-T法直接进行131I标记,操作简便,标记时间短。合成的131I-Caerin标记率约92.25%～98.25%,放射性浓度约1.38×105KBq/mL（3.73 mCi/mL）,其为无色、透明、澄清的溶液,pH值约7.5。131I-Caerin的脂水分配系数为0.827±0.036,呈弱脂溶性。同时,131I-Caerin无论储存在室温（25℃）、37℃中,还是放置在室温（25℃）、37℃下的胎牛血清和生理盐水,至72h仍具有良好的体外稳定性。第三部分131I-Caerin在人甲状腺癌的体内外生物学评价。131I-Caerin能被CAL-62及B-CPAP细胞摄取,并且随时间延长结合率逐渐上升,具有较好的结合及滞留能力。CCK-8实验结果显示,131I-Caerin对CAL-62及B-CPAP细胞具有一定的细胞增殖毒性作用,并且比Caerin多肽及Na131I的细胞毒性作用更强。我们成功制备CAL-62荷瘤裸鼠肿瘤模型,通过瘤体内注射各组药物后,各组荷瘤裸鼠的体重随着治疗时间的延长而逐渐增加,各组间差异均无统计学意义（P>0.05）。肿瘤生长情况结果显示,131I-Caerin组及Caerin组的荷瘤裸鼠肿瘤体积逐渐缩小,与PBS组或Na131I组对比,差异具有统计学意义（P<0.05）,131I-Caerin组的肿瘤体积缩小比Caerin组明显,而PBS组或Na131I组的荷瘤裸鼠肿瘤体积缓慢增加。治疗后肿瘤组织重量显示,与PBS组或Na131I组对比,131I-Caerin组及Caerin组的肿瘤重量较轻。可能由于观察时间较短,暂时各组之间肿瘤重量差异均无统计学意义（P>0.05）。但通过HE染色结果显示,131I-Caerin组肿瘤组织明显坏死,且比Caerin组的坏死程度更明显。研究结论:Caerin多肽对CAL-62及B-CPAP细胞具有一定的细胞毒性作用,能被两种甲状腺癌细胞株摄取并富集于细胞质中。可成功获得较高标记率及较好稳定性的131I-Caerin,其在CAL-62及B-CPAP细胞中具有较好的结合及滞留能力、具有细胞毒性作用、在体内对CAL-62荷瘤鼠的肿瘤生长具有一定的抑制及治疗作用。131I-Caerin有成为甲状腺癌的新型放射性治疗药物的潜力,尤其是甲状腺未分化癌,同时也为RAIR-DTC的治疗拓展了新思路。