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肠道病毒71型(EV71)被认为是自脊髓灰质炎病毒被消灭以来最为重要的具有神经症状的肠道病毒之一。EV71病毒感染能引起手足口病，水疱性咽峡炎等症状。众多临床病例显示，其感染常伴随着包括TNF-α和IL-6在内的众多炎症因子的大量表达，TNF-α作为一种参与先天免疫和特异性免疫反应的细胞因子，它所介导的NF-κB转录激活是宿主抗病毒反应的一种重要手段。早期的研究已证明肠道病毒属的众多成员都能通过某种机制调节TNF-α介导的NF-κB的激活，从而调控宿主的免疫系统，我们推断EV71也可能具有这样的免疫调控功能。在本论文中我们证实了这一假设，发现EV71的2C蛋白能够抑制TNF-α介导的NF-κB激活并进一步阐明了2C抑制NF-κB激活的机制。
本研究验证了EV71病毒能调控TNF-α介导的NF-κB信号通路，并且发现EV71的2C蛋白可以抑制TNF-α介导的NF-κB激活。我们首先通过免疫荧光和免疫印记杂交的方法证实了EV71病毒能够抑制TNF-α所介导的NF-κB p65亚基的入核转移，然后再利用荧光素酶双报告系统和凝胶迁移实验进一步证实了EV71能够抑制TNF-α介导的NF-κB的转录激活。为找到在EV71病毒抑制NF-κB激活作用中起关键作用的蛋白，我们瞬时转染EV71各介非结构基因的表达质粒于真核细胞，利用荧光素酶双报告系统筛选对TNF-α介导的NF-κB激活有抑制效应的非结构基因。结果发现，2C蛋白能够显著的抑制TNF-α介导的NF-κB激活。阐明了EV71的2C蛋白抑制NF-κB信号通路的具体机制。首先，为找到2C蛋白抑制TNF-α介导的NF-κB信号通路的靶点，我们利用荧光素酶双报告系统发现2C蛋白能够抑制TRAF2，MEKK1，IKKα和IKKβ过量表达所引起的NF-κB的活化，但却不能够抑制持续性活化的IKKβ突变体激起的NF-κB活化。这些结果初步证明了2C蛋白抑制NF-κB活化的靶点可能是IKKβ的磷酸化。之后的Westem blotting结果进一步证实了2C可以抑制IKKβ的磷酸化和IκBα的磷酸化和降解。而免疫荧光共聚焦和免疫共沉淀实验更进一步验证了EV71感染过程中2C蛋白能与IKKβ相互作用，并且只与IKKβ的激酶活性域相互作用。这又为阐明2C蛋白抑制IKKβ磷酸化以及NF-κB活化的机制提供了重要的线索。另外，通过对2C蛋白突变体的研究证明了2C蛋白N端125个氨基酸是抑制NF-κB信号通路的功能域，这为深入研究2C蛋白抑制NF-κB活化通路的机制提供了重要线索。阐明了EV71病毒调控宿主抗病毒免疫的一种新机制，即通过其2C蛋白与IKKβ相互作用抑制IKKβ的磷酸化，进而抑制NF-κB的转录激活。为研究肠道病毒的致病机理及其免疫调控机制提供了重要理论依据。