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该研究以小鼠为研究对象,探索了第一次减数分裂期卵母细胞的化学去核方法,并以化学去核卵母细胞为核受体进行体细胞核移植;并对去核卵母细胞质中微管组织中心组装能力的恢复和重构胚染色质的凝集与纺锤体的组装进行了分析.该实验通过免疫荧光染色法确定了小鼠卵母细胞第一次减数分裂的进程,在此基础上分别用脱羧秋水仙碱和放线菌酮处理成熟培养的小鼠卵母细胞,诱导其核物质取胜极体全部排出.结果表明:体外成熟培养5h(即卵母细胞处于第一次减数分裂前中期),其去核率最高,达85.6﹪;成熟5h之前各组随成熟培养时间的延长而去核率升高,之后各组则降低;自然裸卵去核率显著低于前者(56﹪),因此该方法在卵母细胞-卵丘细胞复合体的完全去核率与传统的物理去核方法相当,从而达到提高小鼠核移植总效率的目标;同时也为大动物的化学去核研究提供实验基础.哺乳动物早期胚胎的发育阻滞是胚胎体外培养的普遍现象.针对BALB/C×ICR F<,1>胚胎的体外发育,研究表明M16能有效克服其体外培养的2-细胞阻滞,使96.2﹪的1-细胞胚胎发育为4-细胞.另外,该试验通过在M16基础上添加EAA、non-EAA和葡萄糖显著提高了胚胎的桑椹率、囊胚率和孵化率;单独添加葡萄糖的培养液,其桑椹率显著升高,但囊胚率和孵化率的升高并不显著,所以胚胎培养液中氨基酸和葡萄糖能协同促进胚胎发育.试验获得2-细胞胚胎和桑囊胚经过受体移植后均出生仔鼠,表明该胚胎体外培养系统的可行性.该研究旨在探索一种崭新的、化学试剂诱导去核卵母细胞为核受体的、无透明带的、手工体细胞核移植方法.第一次减数分裂期小鼠卵母细胞经化学去核后,去除透明带,并胎儿成纤维细胞粘合、电融合并SrC12激活,培养于微孔中.目前此无透明带体细胞核移植胚胎已发育到4-细胞;2-细胞克隆胚胎经输卵管移植到假孕受体后,没有获得怀孕受体.试验还比较了血清饥饿胎儿成纤维细胞、新鲜细胞和冷冻保存细胞对体细胞核移植的影响,发现除融合率外,3组间差异不显著.该试验从化学去核处理孵母细胞移入培养液开始,通过免疫荧光染色对不同时间段细胞中胞质星体的恢复情况进行了跟踪检测.发现,培养0h的去核卵母细胞均没有标记到MTOCs,即在刚刚完成去核的卵母细胞,脱羰秋水仙碱抑制了卵母细胞中微管蛋白单体的聚合作用,无可见MTOCs组装;微管蛋白以单体形式存在,造成免疫荧光标记时胞质深染.培养5h后,53﹪去核卵母细胞可见标记的MTOCs,但数量明显少于对照组,而又多于培养0h的去核细胞,说明此时53﹪的化学去核卵胞质中确有MTOCs的存在,其微管聚合能力正在恢复;MTOCs标记,但其辐射产生的微管纤维短,结构还不够丰满;其余细胞的微管蛋白则丧失重新装配能力.经10h的培养后,42﹪去核卵母细胞标记出MTOCs,但微管纤丝较短;与培养5h的细胞相比,数量增加,MTOCs明显,因而其中的微管聚合能力又进一步提高.继续加长培养时间的试验表明,MTOCs的恢复类似于培养10h,微管组装能力已经最大幅度恢复.