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研究背景：
人工食管研究一直是食管重建外科的热点研究方向，1952年Berman等[1]利用橡胶管构建人工的实验开辟了人工食管研究的先河，近半个多世纪以来国内外学者采用多种材料进行人工食管的构建取得了长足的进展，因新生食管再生及术后狭窄而制约了人工食管的进一步临床应用。
前期的动物实验[2-5]的病理大切片观察表明，人工食管植入犬体内后可诱导出新生食管再生，并可观察到较完整的上皮化过程及部分高级结构(肌层、腺体等)的再生，同时，在新生食管组织中还可以看到部分血管生成。在此过程中，再血管化是新生食管得以存活、重塑的关键所在，本研究拟通过免疫组织化学方法研究不同促血管生成及调节因子参与新生食管再血管化的过程及机制。
1、材料与方法：
1.1人工食管的构建、动物模型建立及人工食管植入
选取健康猪(由广东冠吴生物有限公司提供，检疫4周)的主动脉为原材料进行清洗，以环氧交联法进行组织处理，并以氨基酸溶液进行漂洗及表面修饰，将处理后的猪主动脉剪制成长方形的片状材料，并在洁净工作台下以4/0平制羊肠线缝制成内径2.0cm，壁厚0.5cm，长8～12 cm的人工食管，以生理盐水封存于密封胶袋中经60Co照射消毒后备用。
1.2标本取材、切片及染色
1.2.1标本来源将前期动物实验(人工食管植入后诱导犬新生食管再生的实验动物模型)的新生食管大切片标本进行取材，分别对3、6、12、24个月的新生食管标本各一例进行7个部位(原犬食管、吻合口上缘、新生食管上段、中段、下段、吻合口下缘、原犬胃)的取材，并进行石蜡包埋、切片等备用。
1.3方法：
1.3.1免疫组化：
应用免疫组化法检测3、6、12、24个月的4例实验犬之新生食管的共计28个部位的组织标本中VEGF、endostatin的表达情况，用CD105、CD34标记血管内皮细胞。
1.3.2观测指标：
1.3.2.1观察VEGF、endostatin的表达情况；
1.3.2.2观察CD105、CD34的表达情况；
1.3.2.3检测MVD。
1.3.2免疫组化结果判断参照病理科免疫组织化学阅片常规。
1.3.3测定微血管密度(micro vessel density，MVD)参照Weidner法[7]。
1.4统计学处理
用SPSS15.0软件包进行处理，组间比较用方差分析，非连续性变量以秩和检验，以P<0.05为差异具有统计学意义。
2、结果
2.1标本的取材制备
本组资料中共取材28份(4个不同时段*7个不同部位)，免疫组化制片共112张，即VEGF片28张，endostatin片28张，CD105片28张，CD34片28张。
2.2 IHC镜下情况
2.2.1 IHC检测的大体情况(血管生成的大体情况)
人工食管植入后3个月、6个月、12个月、24个月，在新生食管组织中都可以观察到毛细血管存在。3个月的新生食管组织中可以看到新生血管主要位于粘膜层及外膜层，所形成毛细血管大部分为一层不连续血管内皮细胞围成，甚至为数个内皮细胞组成的细胞簇，缺乏结缔组织，结构欠佳；6个月者可以在粘膜层、肌层及外膜层看到管壁由多层血管内皮细胞组成，管腔结构较3个月者成熟，管腔内可见红细胞，其微血管密度明显较3个月者大，但未见到管腔结构成熟的细小血管；12个月、24个月者在粘膜层、肌层、外膜层均可观察到毛细血管网，毛细血管管腔结构完整，并可以看到部分管壁肌层较发达的细小血管。
2.2.2 VEGF表达情况
本组资料中，VEGF的表达情况较好，在3个月、6个月、12个月、24个月的上皮组织及部分肌组织中可以观察到阳性表达，部分为强阳性表达，但两两比较后发现，各组间差异无统计学意义(P>0.05)。
2.2.3 endostatin表达情况
本组资料中，endostatin为阴性表达；
2.2.4 CD105表达情况
本组资料中，CD105在不同时段不同部位的血管内皮细胞胞浆中均有不同程度的表达，其中在6个月、12个月的部分标本中可观察到强阳性表达。
2.2.5 CD34表达情况
本组资料中，CD34为阴性表达
2.2.6 MVD表达情况
2.2.6.1不同时段MVD的变化情况
从附图3-16-3-20可以看出，3、6、12、24个月的7个部位依次比较，可以看出，原犬食管、原犬胃的微血管密度无差异，随着时间的向前推移，新生食管的上、中、下段呈现出血管慢慢成熟的过程，即由单个内皮细胞或数个内皮细胞围成的毛细血管到管腔富有较厚肌层的小血管。在此过程中，可以看出3个月时，生成之血管尚不成熟，6个月时生成之血管略显成熟，12个月、24个月时生成之血管结构基本稳定，新生食管的微血管密度相差不大，差异仅表现为24个月时的新生食管组织中血管的管腔更显成熟。由于本组资料中样本量较小，故各组间两两比较，差异无统计学意义(P>0.05)。
2.2.6.2同一时段新生食管不同部位MVD的变化情况
分别对3、6、12、24个月的标本群做比较，可以发现原犬食管、原犬胃的微血管密度无差异(P>0.05)。
3、结论：
3.1 CD105是较好的新生血管标志；
3.2人工食管植入后可以动态地观察到新生食管再血管化的过程；
3.3再血管化过程是一个动态过程；随时间推移，新生血管结构趋于成熟，12个月时新生食管再血管化状态基本稳定。
3.4新生食管再血管化的过程不排除宿主两端及原食管床的提供立体血运来源的可能性。