论文部分内容阅读
目的:在肝细胞肝癌(HCC)的临床诊疗中,肿瘤转移是一个非常严重的问题。术前的转移使得很多患者在就诊之初就失去了手术的机会,而术后的转移也严重影响手术的疗效。缺氧诱导因子可以通过上皮-间质转化(EMT)途径促进转移的发生。乙酰辅酶A合成酶2(ACSS2)可以为HIF-2α的乙酰化调节提供乙酰基,在HIF-2α的表观遗传修饰和EMT过程中扮演了重要的角色。我们的工作旨在研究ACSS2和肝细胞癌的转移、预后之间的关系,探索ACSS2在HIF-2α乙酰化调节和转移中发挥作用的机制。方法:通过蛋白质印迹(WB),实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和免疫组织化学(IHC)等方法检测多种肝癌细胞系和组织标本中癌、癌旁的ACSS2表达。利用小干扰RNA(siRNA)技术敲减ACSS2,通过transwell侵袭实验和划痕实验,研究HCC细胞在敲减前后的侵袭和迁移能力变化。WB和RT-PCR检测E-钙粘蛋白、N-钙粘蛋白等EMT相关指标和ACSS2、HIF-2α及其下游分子的表达。免疫沉淀的方法检测HIF-2α的乙酰化水平。所有结果和数据通过SPSS 18.0(Chicago,USA)软件分析并表示为平均值±SD。T检验用于评价两组之间的差异。通过Kaplan-Meier分析计算患者的生存曲线(OS,DFS)。卡方检验用于比较计数资料变量之间的差异。结果:1.WB结果显示,MHCC97L和Hep3B细胞表现出比转移潜能更高的MHCC97H和LM3肝癌细胞系更高的ACSS2表达。肝癌样本的WB和RT-PCR数据显示非癌组织ACSS2表达比癌组织更高。2.划痕实验和transwell侵袭实验表明ACSS2基因敲低促进缺氧条件下HCC细胞的侵袭和迁移能力。3.siRNA干扰后,在缺氧条件下观察到的MHCC97H的形态学变化呈现了EMT现象的发生。WB方法检测EMT的结果显示,敲减ACSS2可以促进缺氧条件下HCC细胞的EMT,然而并不伴有HIF-2α表达量的升高。4.免疫沉淀及WB结果表明,ACSS2降表达后,在缺氧条件下,HIF-2α的乙酰化水平下调,而这种去乙酰化调节增强了HIF-2α的部分转录活性。5.对110例HCC患者标本的免疫组化检测结果表明,ACSS2低表达与临床分期和预后呈负相关。小样本量的WB显示,ACSS2的缺失可能与更大的转移风险相关,ACSS2的缺失可能在HCC发展过程中逐渐发生。结论:ACSS2在HIF-2α的乙酰化修饰调节中发挥重要作用,ACSS2的缺失在缺氧条件下增强HIF-2α的功能,促进HCC转移,与不良预后相关。