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本文根据L-乳酸菌的特性,从自然界筛选高温高产L-乳酸的同型乳酸发酵乳酸菌,对发酵特性、培养基、发酵条件进行研究,菌株进行了鉴定,最后通过紫外线对菌株进行诱变,进一步提高菌株的产酸性能。 1.根据L-乳酸细菌的特性和底物反馈抑制原理,设计了菌种富集培养基、选择性培养基和筛选路线。在夏季广泛采集样品,筛选到28株利用葡萄糖为碳源的产L-乳酸的乳酸菌,52℃发酵48h,L-乳酸产量在60g/L以上。经过复筛及发酵试验,确定了1株以葡萄糖为碳源的乳酸菌为研究对象,记为LB-p,L-乳酸的产量达到了90.85g/L发酵液。测定了此菌株的生长曲线和发酵液中pH的下降趋势。筛选结果证明:在富集培养基和分离培养基中添加L-乳酸钙浓度在60g/L,分离菌种性能优良。 2.对菌株LB-p的发酵培养基进行了优化:通过单因素试验,研究了不同碳源、氮源种类、生长因子、无机盐对L-乳酸产量的影响,并在单因素试验的基础上,利用响应面分析法优化了培养基中影响L-乳酸产量的主要因素,得到了大米糖化液(X1)、蛋白胨(X2)、酵母粉(X3)对L-乳酸产量(Y)的回归方程: Y=90.39+1.17X1+5.36X2+3.10X3-1.48X12-1.92X22-1.55X32+0.66X1*X3-1.39X2*X3 根据响应值典型分析求得了大米糖化液(X1)、蛋白胨(X2)、酵母粉(X3)的最佳组合分别为:125.25g/L、8.79g/L和3.58g/L,其对应的响应值(Y)为94.783g/L。最终确定LB-p的最佳发酵培养基:大米糖化液为125.25g/L,蛋白胨8.79g/L,酵母粉3.58g/L,K2HPO4 3g/L,牛肉膏4g/L,MgSO4 0.1g/L。L-乳酸的最高产量为94.78g/L发酵液,对糖的利用率达到95%。 3.对菌株LB-p的培养条件进行了优化,确定了最佳接种量为8%,最佳发酵温度为52℃,最佳种龄为16h,发酵培养基的最佳装液量为150ml/250ml摇瓶,L-乳酸的中和剂均采用灭菌的碳酸钙。 4.对该菌株的菌落、菌体形态特征的观察,发酵特性和生理生化特征,确定该菌株为嗜