肝细胞癌组织中Cdc25A、cyclin A、CDK2表达及意义

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目的:  肝细胞癌是一种常见的消化道系统恶性肿瘤,近年来其发病率和病死率呈现逐渐升高的趋势,目前对其病因和发病机制尚不清楚。哺乳动物细胞调控是通过抑制和激活细胞周期素依赖性激酶(Cyclin-dependen kinase,CDK)活性来实现的,在不同时期的细胞周期中,不同的CDK与相对应cyclin的装配成全酶,以推动细胞周期进展。CDK能够被CDK激酶和细胞周期活化磷酸酶Cdc25激活,其中Cdc25可通过将CDK和ATP结合的苏氨酸、酪氨酸残基抑制性磷酸化而活化CDK。在人体中共发现Cdc25A、Cdc25B、Cdc25C3个Cdc25家族成员:三者约有40-50%的同源结构序列,它们在细胞周期G1/S、G2/M转换过程中发挥不同的作用。其中Cdc25A可通过将CDK2苏氨酸、酪氨酸残基抑制性磷酸化而活化CDK2,使其与相应的细胞周期蛋白cyclin A结合,促进细胞G1/S期转换。目前已经在多个肿瘤组织中发现Cdc25A过度表达,这为解释肿瘤细胞周期紊乱、生长旺盛、过度增殖提供了证据。  目前关于Cdc25A在肝癌中表达以及其临床意义尚不清楚,因此本研究从蛋白和mRNA水平上检测Cdc25A、cyclin A和CDK2在肝细胞癌组织中的表达情况,并结合临床病理资料探讨它们在肝细胞癌发生、发展中的作用,以及为肝细胞癌的早期诊断和综合治疗提供理论依据。  材料和方法:  1.利用免疫组化法检测45例肝细胞癌组织、30例肝硬化组织和45例正常组织中Cdc25A、cyclin A和CDK2蛋白的表达情况,分析其与临床病理参数间的关系及意义。  2.利用原位杂交法检测45例肝细胞癌组织、30例肝硬化组织和45例正常组织中Cdc25A、cyclin A和CDK2 mRNA的表达情况,分析其与临床病理参数间的关系及意义。  3.利用免疫组化方法检测PCNA、Ki-67蛋白在肝细胞癌中的表达,分析Cdc25A、cyclin A和CDK2与肝细胞癌增殖的关系。  4.采用SPSS18.0统计软件包进行统计分析,采用x2检验分析组间差异以及指标与各病理资料间的关系,相关分析采用Spearman相关性分析,以α=0.05为检验水准,P<0.05时差异有统计学意义。  结果:  1.45例肝细胞癌组织标本中,Cdc25A、cyclin A、CDK2蛋白阳性表达率分别为75.6%(34/45)、62.2%(28/45)、68.9%(31/45);30例肝硬化组织中阳性表达率分别为36.7%(11/30)、13.3%(7/30)、30.0%(9/30);45例正常组织中阳性表达率分别为6.7%(3/45)、2.2%(1/45)、6.7%(3/45);Cdc25A、cyclin A、CDK2在肝细胞癌组织中的表达明显高于肝硬化组和正常组(各组P<0.05)。  2.Cdc25A、cyclin A、CDK2的蛋白表达与HCC病人的性别、年龄、肿瘤大小、有无包膜、AFP水平等病理学指标无关,(P均>0.05),而与病理分级和淋巴结转移有明显的相关性(P均<0.05)。  3.肝细胞癌组织中Cdc25A蛋白和cyclin A蛋白表达正相关(r=0.410,P<0.05),Cdc25A蛋白和CDK2蛋白表达呈正相关(r=0.400,P<0.05),CDK2蛋白和cyclinA蛋白表达呈正相关(r=0.466,P<0.05)。  4.45例肝细胞癌组织标本中,Cdc25A、cyclin A、CDK2 mRNA阳性表达率分别为86.7%(39/45)、71.1%(32/45)、75.6%(34/45);30例肝硬化组织中阳性表达率分别为43.3%(13/30)、30.3%(9/30)、43.3%(13/30);45例正常组织中阳性表达率分别为15.6%(7/45)、4.4%(2/45)、8.9%(4/45); Cdc25A、cyclin A、CDK2 mRNA在肝细胞癌组织中的表达明显高于肝硬化组和正常组(各组P<0.05)。  5.Cdc25A、cyclin A、CDK2 mRNA表达与HCC病人的性别、年龄、肿瘤大小、有无包膜、AFP水平等病理学指标无关,(P均>0.05),而与病理分级和淋巴结转移有明显的相关性(P均<0.05)。  6.肝细胞癌组织中Cdc25A mRNA和cyclin A mRNA表达呈正相关(r=0.327,P<0.05),Cdc25A mRNA和CDK2 mRNA表达呈正相关(r=0.385,P<0.05),CDK2 mRNA和cyclin A mRNA表达呈正相关(r=0.436,P<0.05)。  7.肝细胞癌组织中Cdc25A、cyclin A和CDK2蛋白表达与PCNA、Ki67蛋白表达均呈正相关(P均<0.05)。肝细胞癌组织中Cdc25A、cyclinA和CDK2 mRNA表达与PCNA、Ki67蛋白表达均呈正相关(P均<0.05)。  结论:  1.Cdc25A、cyclinA、CDK2蛋白和mRNA在肝细胞癌组织中高表达,三者在一定程度上参与了肝细胞癌的发生。  2.肝细胞癌组织中Cdc25A、cyclin A、CDK2的高表达与淋巴结转移有关,提示Cdc25A、cyclin A、CDK2在肝细胞癌的发生发展中起重要作用。  3.在肝细胞癌组织中Cdc25A、cyclin A、CDK2三者表达互为正相关,提示Cdc25A可能通过作用于cyclin A-CDK2在肿瘤发生中发挥作用,三者在肝细胞癌发生恶性增殖过程起互相协同的作用。
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