【摘 要】
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PaAFP(P．americana Antifungal Protein)是从美洲商陆(Phytolacca americana L．)的种子中分离出的一种抗真菌蛋白。PaAFP从萌发的种子中释放出来，形成抵抗病原菌的抑制区域，以抵
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PaAFP(P．americana Antifungal Protein)是从美洲商陆(Phytolacca americana L．)的种子中分离出的一种抗真菌蛋白。PaAFP从萌发的种子中释放出来，形成抵抗病原菌的抑制区域，以抵挡微生物的危害。PaAFP具有强碱性，极强的热稳定性，富含6个半胱氨酸。该蛋白具有knottins折叠结构，即一个小型3股反向平行β-折叠片，半胱氨酸序列结构(C...C...CC...C...C)组成二硫键框架和其采用的配对形式(1—4，2—5，3—6)。它对包括立枯丝核菌(Rhizoctonia solani)在内的多种丝状真菌和革兰氏阳性菌生长有很强的抑制作用。目前还没有将PaAFP蛋白转化植物的报道。 烟草是生物学研究中的模式植物。具有生长周期短，易培养等多种优势。本实验以美洲商陆的叶片为材料提取基因组DNA，利用PCR技术扩增PaAFP基因，切除内含子，连接第一外显子和第二外显子，得到PaAFP基因cDNA片段。将PaAFP前体蛋白基因与Ubi启动子、Nos终止子同时克隆于质粒pCAMBIA1300中，构建成为植物表达载体pCAMBIA1300-PaAFP。将重组质粒转入农杆菌LBA4404中，通过叶盘法侵染烟草，通过组培，得到转基因植株。提取转基因烟草总DNA，经PCR，PCR-Southern blotting证实，PaAFP基因已整合到烟草基因组中。RT-PCR检测证明，PaAFP基因已在转基因烟草中转录成mRNA，SDS-PAGE电泳中出现了与目的蛋白相应分子量的蛋白条带。转基因植株苗期抗立枯病试验表明，转基因烟草植株对立枯丝核菌表现出了抗性。
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