【摘 要】
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目的：以脂质负荷（oxLDL）刺激人脐静脉内皮细胞（HUVECs），诱导内皮损伤模型，探索相关转录相关增强子-1（RTEF-1）/内皮分化基因-1（Edg-1）的内皮屏障保护机制。 方法：用50ug/ml的oxLDL按时
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目的：以脂质负荷（oxLDL）刺激人脐静脉内皮细胞（HUVECs），诱导内皮损伤模型，探索相关转录相关增强子-1（RTEF-1）/内皮分化基因-1（Edg-1）的内皮屏障保护机制。 方法：用50ug/ml的oxLDL按时间梯度处理Transwell小室中的单层HUVECs，检测细胞通透性及细胞骨架的纤维状肌动蛋白（F-actin）和磷酸化肌球蛋白轻链（p-MLC）的变化；分别用全长RTEF-1cDNA和RTEF-1siRNA转染HUVECs，给予ox-LDL负荷，观察RTEF-1基因表达背景改变对脂质负荷诱导的血管内皮屏障破坏的影响，并检测Edg-1的表达、上清中Edg-1配体鞘氨醇-1-磷酸（S1P）的含量及细胞中促进S1P合成的关键酶鞘氨醇激酶1/2（SPHK1/2）的表达，同时测定紧密连接（TJ）中连接蛋白Cldn2/3/4的变化；最后分别给予Edg-1的拮抗剂W146、SPHK1的抑制剂PF543干预脂质负荷的RTEF-1o/e细胞模型，检测上述指标的变化实现的。 结果：oxLDL可以诱导HUVECs通透性增加，并且表现为时间依赖性，24h时通透性最大（P＜0.05）；RTEF-1o/e可以抑制脂质负荷对内皮屏障的破坏，使内皮细胞中F-actin及p-MLC聚集于细胞周边，而转染RTEF-1siRNA则进一步增加通透性；RTEF-1表达背景的改变对Edg-1、S1P、SPHK1/2有同向调控作用（P＜0.05），并对Cldn2/3/4均有调控作用；W146和PF543能够抑制RTEF-1o/e的屏障保护作用（P＜0.05），同时导致内皮细胞形态改变，应力纤维形成，细胞间隙增大。 结论：RTEF-1能够缓解脂质负荷引起的内皮屏障破坏，可能是通过Edg-1及S1P调控紧密连接中的Cldn2/3/4，最终导致细胞骨架中F-actin及p-MLC的改变。
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