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肿瘤的发生是多因素协同作用的结果，高危型人乳头状瘤病毒(HPV)已被确定为诱发食管癌等上消化系统癌的重要因素。由于消化系统与人类饮食密切相关，食品中N-亚硝基化合物也是诱发食管癌等上消化系统肿瘤的重要因素。然而，关于N-亚硝基化合物与HPV是否具有协同致癌作用的研究尚无报道。同样，作为细胞恶性转化中重要的一步，宿主细胞中HPV的整合状态很可能在癌症的发生发展过程中起着重要的作用。然而，目前对于很多HPV相关细胞系中HPV的整合状态仍不清楚。因此，明确食品中N-亚硝基化合物等成分与HPV的共同作用对肿瘤发生产生的影响，深入分析HPV在肿瘤细胞中的整合情况成了亟待解决的问题。本研究分为以下两部分，分别从HPV的协同作用和整合情况两方面对HPV的致癌作用进行了研究: 1、HPV16 E5与食品中N-亚硝基化合物的协同致癌作用研究。 本研究首先以腺病毒为载体成功构建了HPV16 E5的腺病毒外源表达系统Adv-HPV16E5，并且通过细胞转化实验发现该重组腺病毒Adv-HPV16 E5可有效诱发正常细胞发生细胞恶性转化，进一步证明了HPV16 E5具有诱发细胞恶性转化的能力。 进而，以慢病毒为载体构建了含HPV16 E5基因的重组慢病毒His-HPV16 E5-Lenti，并将其转染Balb/c3T3细胞，筛选出了可稳定表达HPV16 E5基因的细胞HPV16 E5-Balb/c细胞，获得了稳定转染细胞株HPV16 E5-Balb/c，并且通过细胞转化实验证实其可有效诱发正常细胞发生细胞恶性转化，建立了HPV16 E5-Balb/c细胞转化实验方法，为后续深入研究HPV16 E5基因与其他致癌因素的协同致癌作用奠定了基础。 为了阐明HPV16 E5与食物中的N-亚硝基化合物是否具有协同诱发细胞癌变的作用，通过Balb/c3T3和HPV16E5-Balb/c两个细胞转化实验研究六种食品中的N-亚硝基化合物与HPV16E5的共同致癌作用，发现HPV16 E5与二甲基亚硝胺、二乙基亚硝胺、二丙基亚硝胺、亚硝基吡咯烷均具有协同致癌的作用，且随着浓度的增加协同作用越来越明显。HPV16E5与亚硝基吗啉具有相加的致癌作用。而亚硝基哌啶细胞毒性较大，在浓度低于0.5ng/ml时，HPV16 E5与亚硝基哌啶具有协同致癌的作用。 2、多种癌细胞中HPV整合情况的研究。 本研究通过特异性HPV探针的检测和APOT分析对10个癌细胞系中HPV的存在情况及整合状态进行分析，进而通过统计分析和Genbank检索等生物信息学方法研究HPV整合位点及其特点。发现乳腺癌细胞系MCF7、神经瘤母细胞NH-6和食管癌细胞KYSE150、KYSE140和KYSE450细胞系中未见HPV整合;在转录水平HPV的感染确实发生在了肿瘤细胞Tca83，Hep G2和A549细胞系中，但其插入序列并未转录到mRNA中;融合mRNA序列结果为，EC109(Query98-170)和EC9706(Query99-171)的测序结果位点相同，整合病毒基因都是来自于H-PV的早期E7致癌蛋白，且HPV基因表达区域在人8号染色体的长臂8q24部位，为基因荒漠区。