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目的(一)探索PEG-IL-10对电离辐射照射后皮肤细胞损伤的影响。(二)探索照射前后皮肤细胞IL-10蛋白的水平的变化,筛选可能调控IL-10的miRNA,初步探讨皮肤细胞调控IL-10分泌水平的途径。(三)利用动物模型明确PEG-IL-10对放射性皮肤损伤的保护作用。方法(一)PEG-IL-10在放射性皮肤损伤中的作用:人永生化表皮细胞HaCaT及人成纤维细胞WS1为实验细胞株。使用PEG-IL-10进行预处理后X射线照射,通过使用流式细胞仪检测凋亡率,通过利用氧自由基(ROS)特异荧光探针检测皮肤细胞的氧自由基水平、特异性荧光探针检验各种重要细胞器的结构和功能。(二)miRNA let7e-5p调控IL-10在放射性皮肤损伤中的作用:首先利用ELISA和WB技术检测两种皮肤细胞X射线照射前后,检测IL-10表达水平的变化。通过生物信息学分析,筛选可能起靶向调控作用的miRNA;采取双荧光素酶报告基因技术,验证该miRNA可以靶向调控IL-10;过表达该结果miRNA,采用ELISA技术,检测HaCaT和WS1细胞中IL-10分泌水平。(三)PEG-IL-10对放射性皮肤损伤动物模型的防治作用:选取C57BL/6小鼠为实验对象,建立放射性皮肤损伤模型,皮下注射PEG-IL-10或PBS溶液。照射3天后,取正常或照射野部位皮肤组织,采用ROS(氧自由基)荧光探针及丙二醛(MDA)检测试剂盒,检测电离辐射照射后皮肤组织中氧自由基及丙二醛水平,明确PEG-IL-10对急性放射性皮肤损伤的保护作用。采用长期观察法,评价观察照射后60天内小鼠放射性皮肤损伤的变化并进行统计学分析,后采用HE染色及Masson染色的技术,对皮肤角质层厚度及真皮纤维化进行观察和评价。结果(一)给予PEG-IL-10后,能降低电离辐射引起的皮肤细胞凋亡,使其存活率增高;保护皮肤细胞内线粒体和内质网;降低电离辐射对皮肤细胞间接作用诱导的ROS的产生。(二)通过ELISA和western blot技术,探索细胞在辐射照射前后分泌IL-10水平的变化,结果显示,对照0 Gy组,20 Gy组HaCaT或WS1皮肤细胞在X射线照射后均减少分泌IL-10蛋白。通过荧光素酶报告基因验证了 IL-10和miRNA let7e-5p存在直接结合位点。在HaCaT和WS1细胞中过表达miRNA let7e-5p可以负向调控IL-10蛋白水平。(三)PEG-IL-10对急性放射性损伤的皮肤组织具有促进愈合的作用;能降低皮肤组织中ROS(氧自由基)和脂质过氧化MDA(丙二醛)的水平;在HE和Masson染色中,可以观察到0.2 mg/kg PEG-IL-10组可以缓解电离辐射导致的皮肤组织角质层厚度的增加,缓解真皮纤维化。结论 PEG-IL-10对电离辐射照射后的皮肤细胞损伤有保护作用,IL-10在放射性皮肤损伤中起到抑制放射性纤维化作用,IL-10是miRNA let7e-5p的直接调控靶点,miRNA let7e-5p通过负调控IL-10的表达影响放射性皮肤纤维化的进程。在动物模型中,PEG-IL-10对电离辐射致皮肤损伤有保护作用。