【摘 要】
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沙田柚(Citrus grandis var.shatinyu)是广西的名优水果之一,因其品质优良和较高的营养价值而广受人们的欢迎。但是,沙田柚属于高度配子体自交不亲和的果树,自然坐果率很低,
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沙田柚(Citrus grandis var.shatinyu)是广西的名优水果之一,因其品质优良和较高的营养价值而广受人们的欢迎。但是,沙田柚属于高度配子体自交不亲和的果树,自然坐果率很低,因而要依靠人工异花授粉来提高产量。本研究以未授粉、自交和异交1d、2d、3d的花柱为试材,提取RNA,构建cDNA文库,运用第二代高通量测序技术对其进行转录组测序。随后,对测序结果进行GO功能注释、Pathway通路分析和表达量计算,从中选择出可能与沙田柚自交不亲和有关的核糖核酸酶基因 Unigene34907_All(cgSLA)和 Unigene2441_All(cgSRA),构建植物表达载体,转入拟南芥,对其基因功能进行验证。本论文的结果如下:1.样品通过提取RNA,构建cDNA文库,最终得到总Unigene 90214个,总长142142835nt,平均长度 1576nt,N50 长度为 2413nt。2.获得的Unigene与NR、NT、Swiss-Prot、KEGG、COG、GO数据库比对后,分别有62679、59673、41897、39362、28317、50701条比对到该数据库。通过COG功能分类,获得的Unigene被归类到25个功能类别。其中被归类到通用功能、转录相关功能的Unigene数目最多。3.GO功能富集分析和Pathway代谢通路富集分析的结果表明,获得的Unigene分别被归类到55个GO功能类别和128个代谢通路。CDs预测共获得了62752条CDs,其中比对六大数据库获得61707条,而用软件ESTScan预测得1045条。4.通过SSR分析共获得29055个SSR,其中单碱基重复最多,共有12746个。通过SNP分析,在7个样品中,未授粉花柱的SNP数为47145;异交1d花柱为53617,异交2d花柱为54143,异交花柱为52717;自交1-3d花柱分别为50606、54005和53816个。5.从自交和异交花柱中筛选到差异表达的核糖核酸酶基因38个。从中选择了可能与沙田柚自交不亲和有关的两个基因Unigene34907_All(cgSLA),Unigene2441_All(cgSRA)。构建植物表达载体,利用花絮浸染法转化拟南芥,PCR和测序的结果表明基因已整合到拟南芥基因组。6.RT-PCR验证结果表明,8个沙田柚花柱差异表达的表达趋势与转租测序结果相同。7.对自交和异交花柱转录组测序所得基因进行差异表达分析发现,这些基因主要与植物激素的信号传导途径,或胁迫应答反应有关。
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