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目的:研究同型半胱氨酸(Hcy)对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)迁移能力的影响,并探讨其作用是否与MAPK通路调控肌球蛋白轻链激酶(MLCK)的表达有关。 方法:使用不同浓度的Hcy处理人脐静脉内皮细胞后,倒置显微镜观察细胞形态学变化;MTT法检测Hcy对HUVECs增殖能力的影响;划痕法检测Hcy单独以及联合MLCK抑制剂ML-7、p38通路抑制剂SB、p-ERK通路抑制剂PD、MAPK通路激活剂PMA用药后对 HUVECs迁移的影响;免疫组化以及免疫荧光法检测Hcy对MLCK表达的影响;Western blot法检测不同浓度Hcy对MLCK、MLC磷酸化水平、occludin、CAV-1以及MAPK信号通路相关蛋白表达的影响,同时,检测Hcy联合ML-7、SB、PD、PMA用药后对MLCK和MLC磷酸化表达的影响。 结果:倒置显微镜观察细胞形态后发现Hcy处理后细胞形态不规则,多触角且生长速度降低,MTT结果显示Hcy对HUVECs的增殖有明显的抑制作用,抑制效果呈浓度依赖性。划痕实验显示,Hcy单独及联合MAPK通路激活剂PMA均可促进HUVECs的迁移,而加入抑制剂SB、PD和ML-7后HUVECs的迁移率降低。免疫组化分析表明MLCK的表达量随着Hcy浓度的增加而升高,免疫荧光同样表明Hcy可以增强MLCK的表达。Western blot结果显示Hcy可显著下调occludin的表达,上调MLCK、CAV-1的表达以及MLC、p38、ERK磷酸化水平,加入ML-7、SB、PD后MLCK的表达量及MLC的磷酸化水平明显下降,而MAPK通路激活剂PMA可显著上调MLCK的表达量及MLC的磷酸化水平。 结论:Hcy对HUVECs的迁移具有显著的促进作用,其可能的分子机制是Hcy通过P38/MAPK以及ERK/MAPK通路上调MLCK的表达以及MLC的磷酸化水平。