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登革热是一种蚊媒传播的病毒性疾病，近几十年来全球发病率急剧上升。登革病毒(DENV)属于黄病毒科，至少可分为四个血清型，均可引起不同程度的登革热，严重时可致命。目前尚无特异的治疗办法，只能对症治疗，且唯一上市的登革热疫苗的安全性和有效性一直受到质疑。感染后的快速诊断对于提供适当及时的治疗以最大限度地降低死亡率以及迅速启动公共卫生控制措施非常重要。登革病毒非结构蛋白(non-stmctIlral Drotein，NS)5为病毒复制所中起着核心的作用，是抗病毒药物和疫苗研究的靶标，但在诊断方面的研究还较少，由于其具有高度保守和免疫原性，可能是该类病毒感染的生物标志物。
本研究中针对该蛋白难以表达的问题首先对全长NS5基因序列进行了密码子优化，构建了DENV-2全长NS5表达质粒，进而建立了104kDa全长NS5原核表达体系，经过优化诱导表达条件，获得了带有6×His标签的NS5蛋白的表达，利用镍柱亲和层析纯化表达产物，获得了纯度高于90％的NS5蛋白。
以重组NS5蛋白(rNS5)为抗原，与四种血清型的登革病毒感染病人血清通过酶联免疫吸附测定反应，并以未感染登革病毒的正常人血清作为对照组，发现rNS5可以在不同血清稀释度(1∶500～l∶16000)时，与所有四种型别的登革病毒感染的病人血清反应。将该检测方法与市售的两个ELISA试剂盒进行比较，基于rNS5的测定与MyBioSource或Pallbio的阳性一致率均高于两个试剂盒之间阳性一致率。这些结果表明重组DENV2-NS5是检测登革热病毒感染的有效抗原，可用于登革病毒感染的初步筛查，也可用于估计某个地区的DENV感染率，确定该地区是否支持实施登革热疫苗免疫计划。
另外，本研究以该rNS5蛋白为靶分子，利用噬菌体展示肽库筛共进行了四轮淘洗，每轮淘洗的产率逐渐提高。自第4轮洗脱噬菌体挑取20个克隆，扩增后提取单链噬菌体DNA进行测序。将17个可测得的克隆插入片段进行比较分析，发现17个片段氨基酸序列完全相同。因而筛选得到一个可与rNS5特异性结合的环七肽，未来有可能用于疫苗和抗病毒药物研究等。
本研究中针对该蛋白难以表达的问题首先对全长NS5基因序列进行了密码子优化，构建了DENV-2全长NS5表达质粒，进而建立了104kDa全长NS5原核表达体系，经过优化诱导表达条件，获得了带有6×His标签的NS5蛋白的表达，利用镍柱亲和层析纯化表达产物，获得了纯度高于90％的NS5蛋白。
以重组NS5蛋白(rNS5)为抗原，与四种血清型的登革病毒感染病人血清通过酶联免疫吸附测定反应，并以未感染登革病毒的正常人血清作为对照组，发现rNS5可以在不同血清稀释度(1∶500～l∶16000)时，与所有四种型别的登革病毒感染的病人血清反应。将该检测方法与市售的两个ELISA试剂盒进行比较，基于rNS5的测定与MyBioSource或Pallbio的阳性一致率均高于两个试剂盒之间阳性一致率。这些结果表明重组DENV2-NS5是检测登革热病毒感染的有效抗原，可用于登革病毒感染的初步筛查，也可用于估计某个地区的DENV感染率，确定该地区是否支持实施登革热疫苗免疫计划。
另外，本研究以该rNS5蛋白为靶分子，利用噬菌体展示肽库筛共进行了四轮淘洗，每轮淘洗的产率逐渐提高。自第4轮洗脱噬菌体挑取20个克隆，扩增后提取单链噬菌体DNA进行测序。将17个可测得的克隆插入片段进行比较分析，发现17个片段氨基酸序列完全相同。因而筛选得到一个可与rNS5特异性结合的环七肽，未来有可能用于疫苗和抗病毒药物研究等。