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本课题采用一种抑制基因表达的快速、方便、有效的方法——shRNA表达载体介导的RNA干扰技术，针对斑马鱼DDAH1与DDAH2基因，分别选取了2个靶位点，设计干扰表达盒，将表达盒克隆到含聚合酶Ⅲ类启动子的pU6p的载体上，再将U6启动子和表达盒亚克隆入绿色荧光蛋白载体(有利于阳性个体的筛选)。利用本实验室已有的模式生物斑马鱼为研究对象，将构建好的载体以显微注射的方法，定量注射到斑马鱼受精卵的1细胞期。随后，观察胚胎发育的表型变化，从而推测这两个基因在斑马鱼发育方面的功能。通过一系列的研究发现，shRNA表达载体介导的RNAi能够很好的应用于胚胎发育研究。在验证实验中，RT-PCR结果显示，干扰效果与干扰质粒浓度成正比。实验组中，在500pg/embryo注射量下，DDAH1和DDAH2就能够被特异、有效的抑制，且出现部分胚胎发育不正常；干扰DDAH1后，5.2％的胚胎出现了头部小或无、脊椎歪曲、体节模糊、无尾等严重缺陷；干扰DDAH2后，13％左右的胚胎仅出现局部缺陷，如胸部肿大；同时干扰DDAH1与DDAH2时，胚胎局部缺陷率与严重缺陷率均是单个基因分别被干扰后产生的缺陷率之和——23.9％与6.5％。我们推测DDAH在斑马鱼的胚胎发育过程中起着相当重要的作用。DDAH1可能是与胚胎神经系统发育，体轴、脊椎、体节形成有关。DDAH2可能是与心血管系统发育有关。本论文成功地证明了shRNA表达载体介导的干扰作用能够有效地抑制斑马鱼胚胎DDAH地表达，实验模型能够很好地用来研究发育相关基因，摸索了最佳注射量，初步推测DDAH1和DDAH2的功能。