论文部分内容阅读
由稻瘟病菌Magnaportheoryzae(无性态：Pyriculariaoryzae)引起的稻瘟病是水稻最具毁灭性的病害之一，几乎在世界上所有水稻种植区均有发生。实践证明，控制该病害最有效的方法是培育广谱且持久抗性的新品种，而基因聚合是培育此类品种最有效的途径之一。为了获得对稻瘟病具有广谱持久抗性、广适应性且对环境安全的多基因水稻新品种，本研究开展了以下三方面的工作： 1利用多基因组装及转化载体系统聚合稻瘟病抗病基因及抗逆基因 本研究利用基于Cre/LoxP的多基因组装及转化载体系统对稻瘟病抗病基因Pik及其等位基因Pi7、Pi1、Pik-h以及另一稻瘟病广谱抗性基因Pi36进行了聚合。另外，本研究也对抗病基因与耐冷、耐热基因进行了聚合。共完成了抗病基因聚合的6个双基因转化载体(pYLTAC380DTH-Pik-Pi1、pYLTAC380DTH-Pi7-Pi1、pYLTAC380DTH-Pik-Pi36、pYLTAC380DTH-Pi7-Pi36、pYLTAC380DTH-Pik-Pik-h、pYLTAC380DTH-Pi7-Pik-h)，抗病基因与耐冷基因聚合的4个三基因转化载体(pYLTAC380DTH-Pik-Pi1-SNF2、pYLTAC380DTH-Pi7-Pi1-SNF2、pYLTAC380DTH-Pik-Pi36-SNF2、pYLTAC380DTH-Pi7-Pik-h-SNF2)抗病基因与耐热基因聚合的4个三基因转化载体(pYLTAC380DTH-Pik-Pi1-82.1、pYLTAC380DTH-Pi7-Pi1-82.1、pYLTAC380DTH-Pi7-Pi36-82.1、pYLTAC380DTH-Pi7-Pik-h-82.1)的构建。 2农杆菌介导的水稻转化及阳性植株的获得、鉴定 分别以黑龙江主栽品种空育131，龙粳24及粳稻参考品种日本晴为受体，利用农杆菌介导的水稻转化法进行抗病基因以及抗逆基因的聚合转化。共获得双基因阳性T0植株2030株，三基因阳性T0植株707株。T0植株表型及分子鉴定结果表明，目的基因可以成功表达并且对所选的稻瘟病菌株表现较好的抗性。 3多基因转化效率的比较 对T0植株进行分子鉴定的结果表明，无论是双基因载体还是三基因载体的转化，潮霉素的整合效率均远远高于目的基因的整合效率；而且在同一受体品种背景下，三基因的转化率明显低于双基因的转化率，虽然前者只是多了4.2kb的基因片段。由此说明，T-DNA所含目的基因(包括选择标记)的大小是决定其整合效率的主要因素。就受体品种的背景而言，无论是双基因还是三基因的转化，3个品种的转化率之间存在显著的差异，其中龙粳24的最低。这表明不同的受体品种之间转基因效率存在显著的差异。