细菌上清对酵母合成PHB能力的影响

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聚羟基脂肪酸酯(polyhydroxyalkanoates,简称PHA)是微生物在碳源过剩其他营养不均衡条件下发酵生成的一种储存碳源和能量的胞内聚酯,是应用广泛的生物可降解塑料。其中聚羟基丁酸酯(PHB)是PHA家族中的研究热点,它与石化塑料相似但又具有生物可降解,生物相容性、表面可修饰性等优良性状,被称为“绿色塑料”,前景广阔。从活性污泥驯化得到的高产PHB菌群中筛选出高产PHB的细菌和酵母,通过“人工复配”的方法分析细菌的上清液对酵母合成PHB的促进作用。为挖掘酵母合成PHB的潜力奠定实验基础,对酵母单菌株、菌群中酵母合成PHB代谢机理具有参考价值。  通过尼罗蓝平板染色法初筛和气相色谱法测定PHB含量复筛,从活性污泥驯化得到的高产PHB菌群中筛选出高产PHB的10株细菌和8株酵母菌。经细菌的16SrRNA和酵母的26SrRNA菌种鉴定及系统发育树分析,分离获得的细菌主要有Kurthia、Bacillus、Acinetobacter、Enterobacter4个属。另外,获得多株酵母,其中优势酵母为Rhodotorula、Candida、Geotrichum klebahnii,菌群中还存在酵母Pichia guilliermondii和Meyerozyma guilliermondii。分离得到细菌和酵母菌群组成多样性较丰富,经鉴定都属于已报道高效合成PHB的菌属。  “人工复配”实验表明细菌发酵上清液对大多数酵母积累PHB有促进作用,其中对酵母Y6影响最大,人工复配酵母Y6 PHB的产量是纯酵母Y6的1.49倍。选取酵母Y1(Rhodotorula mucilaginosa)和酵母Y6(Pichia guilliermondii)作为出发菌株,分析添加细菌上清液后酵母在发酵过程中pH值、COD、细胞干重、总磷含量的动态变化与PHB合成的关系,结果表明酵母高产PHB的最佳培养时间是54-56h,此时酵母Y1高产PHB达干重的5.941%,Y6为5.203%。添加细菌上清液后酵母Y6也是54-56 h时达到最高产,此时PHB的含量高达6.869%。加入细菌上清液后pH值升高,COD消耗加快,吸磷和释磷的幅度变大,各指标均是向有利于合成PHB发展变化的。这些变化趋势与细菌上清液里的酶或代谢产物有关,是加入细菌上清液后促进酵母产PHB的原因。这也解释了酵母单独发酵产PHB含量低,而菌群中的酵母产PHB较高,可能与菌群中种间协作有关。对酵母进行透射电镜扫描,可直接观察到在体积较大的酵母细胞中含有部分白色的PHB颗粒,胞内还有很多空间可以发展利用。
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