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沃尼妙林属于截短侧耳素类药物,主要用于防治畜禽螺旋体和霉形体引起的疾病。但是由于沃尼妙林的最大紫外吸收靠近远紫外区,而靠近远紫外区各种杂质的干扰又比较明显,这无疑增大了其残留检测的难度,同时基于动物性食品基质的复杂性和兽药残留的痕量分析要求,建立高选择性样品预处理技术具有重要实际意义。以分子印迹聚合物为基础填料的分子印迹固相萃取,能从复杂样品中准确富集靶标分子,具有高特异性与高选择性、稳定性好和可重复使用等优点,已成为近年来食品安全检测领域最具有应用前景的技术之一。
本论文利用分子印迹技术,以沃尼妙林前体为虚拟模板分子,甲基丙烯酸为功能单体,乙二醇二甲基丙烯酸酯为交联剂,合成了对沃尼妙林具有高选择性的分子印迹聚合物。通过L9(34)正交试验优化的聚合物制备配合为:1.0mmol沃尼妙林前体,4.0mmol甲基丙烯酸,20.0mmol乙二醇二甲基丙烯酸酯,6.0mL乙腈,30.0mg偶氮二异丁腈。分别通过静态吸附,穿漏等试验对合成的聚合物性能进行了表征,分子印迹固相萃取柱对沃尼妙林的最大吸附量达1000μg·g-1,NIP最大吸附量为333μg·g-1。并用合成的印迹聚合物作为吸附材料用于装填固相萃取小柱,考察了制备的分子印迹固相萃取小柱的活化及平衡溶液、上样介质溶液、洗涤液和洗脱溶剂等因素对沃尼妙林吸附保留回收率的影响。
建立了一种快速、准确、简单的基于分子印迹固相萃取-高效液相色谱检测饲料中沃尼妙林的新方法。在碱性环境下,使用乙酸乙酯从饲料中提取沃尼妙林,用自制的沃尼妙林分子印迹固相萃取柱净化饲料提取液,采用高效液相色谱紫外检测。该方法在5.0～200 mg·kg-1范围内线性关系良好,回归系数为0.9993,饲料中沃尼妙林的检测限为1 mg·kg-1。空白饲料在5.0、20.0及50.0 mg·kg-1三个添加水平,通过分子印迹固相萃取净化,沃尼妙林的回收率在76.3％～94.9%之间,批间和批内变异系数均在8.2%以下。
同时,制备的分子印迹柱也应用到猪肌肉、肾脏和肺脏等猪组织样品中沃尼妙林残留的富集、净化。用乙腈从猪组织中提取沃尼妙林残留,用自制的沃尼妙林分子印迹柱净化组织提取液,采用高效液相色谱紫外检测。在5.0、20.0及50.0 mg·kg-1三个添加水平上,沃尼妙林的回收率为80.3%～92.7%,批间和批内变异系数均在6.0%以下,表明所建立分子印迹固相萃取-高效液相色谱检测方法的可行性。