半乳糖凝集素-1联合雷公藤内酯醇对大鼠急性脊髓损伤的保护作用研究

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目的:  探讨半乳糖凝集素-1(Galectin-1,Gal-1)联合雷公藤内酯醇(Triptolide, Tri)对大鼠急性脊髓损伤(Acute Spinal Cord Injury,ASCI)的保护作用及机制研究,拟为临床治疗ASCI提供一种新的思路及方法。  方法:  60只SPF级雄性SD大鼠,采用随机数表法将其分为6组,每组10只,分别为联合组、Gal-1组、Tri组、甲强龙组、单纯损伤组及空白对照组。各组大鼠通过摸肋骨的方法确定胸10椎体(T10),行T10椎板切除,其中五组均采用Nystrom法脊髓损伤造模,空白对照组仅做脊髓暴露,不行脊髓压迫。造模成功后立即给药,给药途径均采取腹腔注射,其中联合组:术后当天给予Gal-1 4 mg/kg及Tri 0.4 mg/kg,每天1次,连续一周;Gal-1组:术后立即行Gal-1 4 mg/kg,每天1次,连续一周;Tri组:Tri 0.4 mg/kg,每天1次,连续一周;MP组:术后立即行MP首次剂量为30 mg/kg,12小时后再次给予相同剂量MP,以后每日注射1次,连续3天;单纯损伤组和空白对照组术后给予生理盐水3 ml/kg,以后每日注射1次,持续一周。各手术组在术后1、3、7、14天各取5只大鼠,先做BBB评分和斜板试验,然后经眼静脉取血,行酶联免疫吸附试验(Enzyme Linked Immunosorbent Assay,ELISA)测定大鼠血清中IL-10及TNF-α的含量;在术后14天行大鼠心脏灌注,取损伤处脊髓组织做苏木精—伊红染色(Hematoxylin-Eeosin Staining,HE)及生长相关蛋白43(Growth Associated Protein-43, GAP-43)免疫组化染色观察形态学变化。  结果:  (1) BBB评分及斜板试验:术后各时间点各组大鼠的BBB评分及斜板试验结果均低于空白对照组(P<0.05)。ASCI组间比较:术后1天,各手术组大鼠均出现双后肢瘫痪,即BBB评分为0分(除外空白对照组);术后3天,各ASCI组BBB评分及斜板试验结果比较无显著性差异;术后7、14天,联合组大鼠BBB评分及斜板试验结果显著高于Gal-1组、Tri组、MP组及单纯损伤组(P<0.05);而其余四组间比较差异无显著性。  (2) HE染色结果显示:空白对照组脊髓神经组织未见明显改变;各ASCI组间比较:伤后14天HE染色显示,联合组及MP组脊髓神经组织出现核固缩、解离的神经元数量及胶质细胞数量均少于Gal-1组、Tri组及单纯损伤组,且联合组及MP组的大鼠病理组织结构较Gal-1组、Tri组及单纯损伤组清晰。  (3) GAP-43免疫组化结果显示:术后14天,联合组大鼠GAP-43免疫组化的IOD值明显高于Gal-1组、Tri组、MP组及单纯损伤组(各手术组平均IOD值:联合组:122±16;Gal-1组80±18;Tri组:78±12;MP组:83±16;单纯损伤组:66±15;空白对照组:52±13);而其余四组间差异无显著意义。  (4) 血清IL-10检测:术后1、3天,MP组血清中IL-10表达水平较联合组、Gal-1组、Tri组及单纯损伤组高(P<0.05),而其余四组结果无显著差别;术后7、14天,联 合组血清IL-10的表达水平显著高于Gal-1组、Tri组、MP组及单纯损伤组(P<0.05),而其余四组结果无显著差别;  (5)血清TNF-α表达水平的检测:术后1、3天,MP组血清中TNF-α表达水平较联合组、Gal-1组、Tri组及单纯损伤组高;术后7、14天,联合组大鼠血清TNF-α的表达水平显著低于Gal-1组、Tri组、MP组及单纯损伤组(P<0.05 );而其余四组间比较无显著差别。  结论:  实验验证了半乳糖凝集素-1联合雷公藤内酯醇对急性脊髓损伤具有一定的神经保护作用,且其神经功能恢复的程度优于单独使用Gal-1或Tri。其作用机制可能是通过增加IL-10及降低TNF-α表达水平来发挥保护作用的。
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