论文部分内容阅读
目的:膝关节骨性关节炎是常见关节疾病,好发于老年患者,男女均可发病。在大于60岁人群中有超半数可在影像学中查见KOA表现,病程发生、发展是长期的慢性的过程,晚期患者膝关节的疼痛症状、关节功能障碍明显加重,导致生活质量严重下降。随着高龄人群在社会中的比例增加,该疾病的罹患率增高趋势明显。在膝关节骨性关节炎的研究不断深入以及中医药物研究得到大力发展的背景下,本课题设计了蛭龙活血通瘀胶囊用于大鼠膝关节骨性关节炎的干预治疗,通过比较各个实验分组中大鼠膝关节软骨的损伤程度、组织形态学改变、关节组织中SOD、MDA含量、软骨中Ⅱ型胶原、MMP-13的表达水平等检测指标,验证蛭龙活血通瘀胶囊对膝关节骨性关节炎的预防和治疗效果,探讨可能的治疗机制,通过动物实验论证蛭龙活血通瘀胶囊可通过养肝补肾、通经活瘀、通畅筋骨等营养及润滑膝关节软骨,缓解或治疗膝骨关节炎。方法:具体实验步骤如下:分组:选用SD大鼠作为本次的实验对象,雄性,4组*10只随机分组:A空白组、B模型组、C蛭龙活血通瘀胶囊低剂量治疗组(0.05g/kg/d),D蛭龙活血通瘀胶囊高剂量治疗组(0.1g/kg/d)。造模:KOA模型采用改良的Hulth法手术建立模型,术后饲养6周,实验动物KOA模型制模成功,分别给予可食用水、蛭龙活血通瘀胶囊低剂量、高剂量灌胃8周。提取膝关节滑膜萃取液测定SOD、MDA含量,切取内侧膝关节股骨端的关节软骨,解剖以及切片HE染色,观察软骨组织形态学变化并以Mankin’s评分标准评分比较;免疫组化法测定软骨中MMP-13、Ⅱ型胶原表达水平并行评分。通过SPSS统计软件对数据进行分析,从而比较蛭龙活血通瘀胶囊对上述指标的影响,以及分析并检验蛭龙活血通瘀胶囊对膝关节骨性关节炎的治疗效果。结果:一般情况:实验中全部SD大鼠存活,无感染、死亡例;手术造模术后14周,在模型组中建立典型的晚期KOA模型。(1)膝关节滑膜SOD(U/ml)检测结果:A组:166.32±19.86;B组:40.74±12.06;C组:105.45±18.88;D组:120.96±8.49。相较于其他三组,在B组中SOD活力含量明显减少(p<0.01);而在两组药物治疗组中D组SOD含量明显的更高(p<0.05 p=0.032)。(2)膝关节滑膜MDA(nmol/mgprot)检测结果:A组:15.79±3.43;B组:51.82±10.15;C组:34.65±6.63;D组:23.66±6.62。各组中A组的MDA含量最低,药物治疗组中D组的MDA含量高于A组(p<0.05 p=0.032),剩余各组间的结果比较区别更显著(p<0.01)。(3)HE染色观察:模型组软骨破坏最为严重,软骨层厚度严重减退,切片染色可见褪色明显,软骨表面凹陷,软骨缺损区形成;软骨细胞排列紊乱,表层细胞簇集,深部软骨细胞可见明显的细胞核压缩、胞质肥大,软骨细胞数量有减少趋势,部分区域可见细胞染色缺失;潮线消失,软骨纤维化明显。药物治疗组:关节软骨层不同程度的减退,染色程度有不同程度的变浅,软骨面见粗糙毛躁,不够光滑,部分软骨可见不规则裂隙;表层软骨细胞增多,呈弥漫性,部分区域可见细胞簇集成团,中、深层部分软骨细胞可见胞质肥大趋势,部分细胞可见明显的细胞核压缩,胞质透明肿大;潮线结构多完整,在C组中可观察到较明显的软骨纤维化。D组中关节软骨修复程度优于C组。(4)关节软骨mankin’s评分:A组:0.30±0.48;B组:10.30±1.89;C组:6.20±1.03;D组:5.6±1.26。在药物治疗组中C组评分高于D组,但比较结果两组并无差异(p>0.05 p=0.298),余各组间比较的差异非常明显(p<0.01)。(5)免疫组化染色:空白组中CollagenⅡ呈褐色的强阳性表达,MMP-13不表达,或呈极弱的阳性表达。在B组中,关节软骨破坏明显,MMP-13开始呈强阳性表达,而CollagenⅡ表达强度较空白组明显减弱,表现为弱阳性表达。在药物治疗组中,MMP-13、CollagenⅡ表达呈一定的负相关关系,软骨损伤越严重,MMP-13阳性表达越强,CollagenⅡ阳性表达越弱。在B组中软骨细胞周围和C组的胞质中可以看到MMP-13染色加深更明显的染色反应;在D组中的部分细胞胞质和细胞周围可明显观察到CollagenⅡ染色加深。(6)软骨中CollagenⅡ表达评分:A组:11.40±1.25;B组:3.40±1.17;C组:5.70±1.49;D组:6.30±2.06。在药物治疗组间比较无差异(p>0.05 p=0.388),余各组间比较差异显著(p<0.01)。(7)软骨中MMP-13表达评分:A组:0.2±0.42;B组:8.40±1.90;C组:6.70±1.70;D组:5.30±1.64。在药物治疗组间C组含量更高(p<0.05 p=0.048)、比较于低剂量组,B组中MMP-13的含量更高(p<0.05 p=0.018),余各组间比较差异更加显著(p<0.01)。结论:1.蛭龙活血通瘀胶囊可以增加SD大鼠机体内SOD活力,增加机体抗氧化能力,降低氧自由基对关节滑膜、软骨的损伤,抑制关节滑膜炎症,刺激软骨基质代谢,加强软骨修复能力。2.蛭龙活血通瘀胶囊可以抑制软骨中MMP-13的表达,促进CollagenⅡ的合成,加强软骨基质的修复,增强软骨基质抵抗酶解破坏能力,从而减缓OA疾病的进程。