基于THP-1细胞模型荆芥挥发油抗炎作用的NLRP3炎症小体调控机制研究

来源 :成都中医药大学 | 被引量 : 2次 | 上传用户:pandawang1231
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目的:以THP-1细胞为载体,观察荆芥挥发油及其主要成分胡薄荷酮抗炎作用的NLRP3炎症小体调控机制,进一步完善荆芥挥发油与模式识别受体相关的抗炎作用机制研究。方法:采用GC-MS法测定荆芥挥发油的化学成分,MTS法测定荆芥挥发油对细胞的毒性作用。利用佛波酯(PMA)将THP-1细胞诱导分化为巨噬细胞,然后采用LPS与激活物(ATP、Nigericin、CPPD或CaCl2)进行造模,观察荆芥挥发油对NLRP3炎症小体激活的影响:(1)ELISA法检测细胞上清中IL-1β、IL-18、Caspase-1(p20)、Pro-IL-1β水平;(2)RT-PCR法检测细胞中NLRP3、Caspase-1、IL-1β、IL-1α、IL-6 mRNA的表达;(3)Western Blot法检测细胞裂解液中Pro-IL-1β、NLRP3、Pro-Caspase-1和ASC蛋白表达;(4)荧光探针法测定细胞ROS含量,免疫荧光法测定Cathepsin B、NLRP3和ASC蛋白表达。结果:(1)荆芥挥发油中胡薄荷酮的相对含量为33.40%,为其主要成分之一。(2)荆芥挥发油和胡薄荷酮在≤0.4mg/mL浓度时对THP-1巨噬细胞无毒。(3)0.2mg/mL浓度荆芥挥发油和胡薄荷酮均对ATP、Nigericin、CPPD和CaCl24种激活物诱导的THP-1巨噬细胞上清中IL-1β的高分泌具有明显抑制作用(P<0.05或P<0.01),对ATP、Nigericin致细胞上清中Pro-IL-1β的分泌具有显著下调作用(P<0.05或P<0.01);0.2mg/m L荆芥挥发油亦对ATP、Nigericin致细胞上清中IL-18的分泌有显著降低作用(P<0.05或P<0.01)。(4)0.2mg/mL荆芥挥发油和胡薄荷酮对ATP诱导的THP-1巨噬细胞中NLRP3、Caspase-1、IL-1β、IL-1α、IL-6 mRNA的高表达有显著下调作用(P<0.05或P<0.01)。0.2mg/m L荆芥挥发油和胡薄荷酮对Nigericin致THP-1巨噬细胞中Caspase-1、IL-1β、IL-1α、IL-6 mRNA的表达具有下调作用(P<0.05或P<0.01),0.2mg/m L荆芥挥发油同时对NLRP3 mRNA的表达有降低作用(P<0.05)。(5)0.2mg/m L荆芥挥发油和胡薄荷酮对Nigericin致THP-1巨噬细胞上清中Caspase-1(p20)蛋白表达有显著降低作用(P<0.05或P<0.01),0.2mg/m L胡薄荷酮对ATP致细胞上清中Caspase-1(p20)蛋白表达亦有显著降低作用(P<0.05)。0.2mg/m L荆芥挥发油和胡薄荷酮对ATP致细胞裂解液中Pro-IL-1β蛋白表达均具有显著下调作用(P<0.05)。(6)0.2mg/m L荆芥挥发油和胡薄荷酮能抑制ATP致THP-1巨噬细胞中NLRP3和ASC的共定位效应(P<0.01),降低ATP、Nigericin致THP-1巨噬细胞中ROS的表达(P<0.05或P<0.01),并能减少CPPD致THP-1巨噬细胞中Cathepsin B蛋白的表达(P<0.01)。结论:荆芥挥发油体外对各种激活物(ATP、Nigericin、CPPD或CaCl2)所诱导的THP-1巨噬细胞上清中IL-1β的高分泌具有抑制作用,表现出抗炎效应,作用机制可能与抑制NLRP3炎症小体的激活有关,胡薄荷酮作用与其相似,可认为是其有效物质基础之一。研究结果进一步完善了解表药荆芥挥发油部位抗炎作用的现代药理研究,为其治疗“表证”的临床运用提供了药理学依据。
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