论文部分内容阅读
本研究从海南、云南的热带和亚热带原始森林及周边地区采集土壤683份,分离出苏云金芽孢杆菌野生菌株92株,伴孢晶体类型有菱形、方形、球形、椭球形、无定形等,充分体现了我国菌株资源的多样性。在41份出土Bt的土壤中,32份（78%）采自原始森林,14.6%土壤取自森林草地,7.4%属于大田土壤。通过对土壤资源、气候、海拔等地理特征分析,总结出了Bt资源的分布规律:热带、亚热带Bt分离率高,温带其次,寒带分布数量有限;植被覆盖率高的地区,生态条件优越,Bt分离率高;昆虫种类和数量丰富的地区,Bt的种类和数量丰富;高山地区（海拔高于3000米,尤为高山草甸）,Bt含量极少。土壤表面腐质层越厚,土壤所含腐殖质越丰富,Bt含量越多;Bt在山坡阳面比阴面分布广。同时用26对可鉴定31种cry基因型引物对以上92株菌和我国东北地区的34株菌进行了PCR-RFLP分析鉴定:含有cry1型基因的菌株58株,含有cry2型基因的菌株32株,含有cry8型基因的菌株12株,含有cry9型基因的菌株3株,含有cry11型基因的菌株12株,含有cry30型基因的菌株14株,含有cry40型基因的菌株1株。有42株菌未鉴定出基因型。126株野生菌株的伴孢晶体SDS-PAGE分析结表明:32株同时含有cry1型基因和cry2型基因的菌株表达130 kDa和60 kDa的蛋白,其伴孢晶体为菱形;在36株表达130 kDa蛋白的菌株中,24株仅含有cry1型基因,伴孢晶体为菱形;12株含有cry8Ea基因,伴孢晶体为球形。 菌株Y41同时含有一个新型cry30基因和一个新型cry40基因,这种基因组合在国内外系首次发现。两个基因的部分序列分别被克隆、测序（cry30型基因得到1422 bp长度的序列,cry40型基因得到1382 bp长度的序列）。其中,cry30型基因与模式基因cry30Aa和cry30Ba的同源性分别为72%和73%,cry40型基因与模式基因cry40Aa和cry40Bb分别保持93%和36%的同源性。在菌株Z2-34中一个新cry30基因被同时发现,得到的1419 bp的序列与模式基因cry30Aa和cry30Ba的同源性分别为89%和76%。而菌株Y41和菌株Z2-34中的两个新cry30基因的同源性为73%。以上三个基因的部分序列已在GenBank登记注册（Accession numbers分别为AY817147、AY817148、AY916046）。 生物活性测定结果表明菌株Y41和菌株Z2-34对伊蚊有毒效,LC50分别是10.8433μg·mL-1和7.2317μg·mL-1。菌株Z34-28含有一个cry11Bb基因和cry30Aa基因,对伊蚊的LC50是27.3787μg·mL-1。42株没有鉴定出基因型的菌株对小菜蛾、棉铃虫、甜菜夜蛾、玉米螟、二化螟、粘虫、拟谷盗、黄粉虫均无毒力。