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本文以哈萨克羊作为研究对象,通过亚硫酸氢盐修饰方法检测6月龄不同组织(股二头肌、股三头肌、半腱肌、半膜肌、背最长肌和脂肪组织)MSTN基因DNA甲基化水平和1-5月龄肌肉组织和脂肪组织的MSTN基因DNA甲基化水平,及其与MSTN基因的表达量,MSTN/Smad信号通路基因表达量,生长指标进行关联性分析,同时与巴什拜羊的MSTN基因DNA甲基化水平进行比较分析,探索哈萨克羊不同组织MSTN基因DNA甲基化水平在不同阶段的规律,为哈萨克羊遗传育种选育提供科学依据。1.哈萨克羊1-5月龄肌肉与脂肪组织的MSTN基因DNA甲基化水平研究肌肉组织:1-5月龄的MSTN基因DNA甲基化水平呈高甲基化水平。1-5月龄的肌肉组织MSTN基因DNA甲基化概率为74.2%、71.6%、80.5%、81.5%、77.4%。1-5月龄脂肪组织 MSTN基因 DNA 甲基化概率为 78.4%、75.8%、76.3%、78.9%、83.2%。哈萨克羊肌肉组织中1月龄、2月龄的MSTN基因表达量与DNA甲基化概率呈负相关,相关系数为r=-0.46,r=-0.50(P>0.05)。3月龄、4月龄、5月龄MSTN基因表达量与DNA甲基化概率呈显著负相关关系,相关系数为r=-0.62、r=-0.57、r=-0.60(P<0.05);1月龄、2月龄、3月龄、4月龄的脂肪组织MSTN基因表达量与DNA甲基化概率呈负相关关系,相关系数为 r=-0.60(P>0.05)、r=-0.56(P<0.05)、r=-0.52、r=-0.55(P>0.05)。5月龄脂肪组织MSTN基因表达量与DNA甲基化概率呈极显著负相关关系(r=-0.88,P<0.01)。2.哈萨克羊6月龄各组织的MSTN基因DNA甲基化水平研究6月龄哈萨克羊肌肉组织甲基化水平较低,脂肪组织甲基化水平最高,股二头肌、股三头肌、半膜肌、半腱肌、背最长肌和脂肪组织的DNA甲基化概率分别为34.7%、22.6%、23.3%、28%、42.6%和 76.4%。6月龄哈萨克羊各组织的DNA甲基化概率与MSTN基因的总表达量呈显著的中负相关(r=-0.58,P<0.05)。股二头肌、股三头肌、半膜肌、半腱肌、背最长肌MSTN基因DNA甲基化概率与MSTN基因表达量呈负相关,相关系数分别为r=-0.56、r=-0.48、r=-0.50、r=-0.58、r=-0.50。脂肪组织MSTN基因表达量与DNA甲基化概率呈显著强负相关(r=-0.74,P<0.05)。3.6月龄各组织MSTN基因DNA甲基化概率与MSTN/Smad信号通路基因表达量相关性研究6月龄哈萨克羊肌肉组织与脂肪组织MSTN基因DNA甲基化概率与MSTN/Smadd信号通路基因表达量相关性总体来看,Smad3信号通路基因表达量与股二头肌、股三头肌、半膜肌、半腱肌、背最长肌、脂肪组织MSTN基因DNA甲基化概率均呈弱负相关关系。Smad4信号通路基因表达量与股二头肌、半膜肌MSTN基因DNA甲基概率呈中负相关关系(r=-0.31,P<0.05)。Smad7信号通路基因表达量与半膜肌MSTN基因的DNA甲基概率呈中负相关关系(r=-0.31,P>0.05)。TGFBRⅡ基因的表达量与背最长肌差异显著,呈中负相关关系(r=-0.45,P<0.05)。4.6月龄各组织MSTN基因DNA甲基化概率与生长指标相关性研究6月龄哈萨克羊MSTN基因DNA甲基化概率与生长指标的相关性总体来说,哈萨克羊股二头肌、股三头肌、半膜肌、半腱肌、背最长肌、脂肪组织的MSTN基因DNA甲基化概率与体重均呈正相关关系 r=0.61(P<0.05)、r=0.45、r=0.39、r=0.32、r=0.30(P>0.05)、r=0.63(P<0.05)。胸围除了半腱肌外其他的股二头肌、股三头肌、半膜肌、背最长肌、脂肪组织MSTN基因DNA甲基化概率均呈中正相关关系r=0.31、r=0.3(P>0.05)、r=0.62(P<0.05)、r= 0.5(P>0.05)、r=0.61(P<0.05)。管围与半腱肌MSTN基因DNA甲基化呈强显著正相关关系(r=0.65,P<0.05)。体长与半膜肌、背最长肌MSTN基因DNA甲基化概率呈中正相关关系r=0.39(P>0.05)、r=0.41(P<0.05)。体高与半膜肌、半腱肌MSTN基因DNA甲基化呈正相关关系r=0.42(P>0.05)、r=0.48(P<0.05)。5.6月龄哈萨克羊与5月龄巴什拜羊各组织MSTN基因DNA甲基化水平比较两个品种的股二头肌、股三头肌、半膜肌、半腱肌的MSTN基因表达量与DNA甲基化概率均呈中负相关(r=-0.5、r=-0.5,P<0.05)。哈萨克羊背最长肌MSTN基因表达量与DNA甲基化概率呈负中相关(r=-0.5,P>0.05),但巴什拜羊背最长肌呈强负相关(r=-0.87,P<0.05)。哈萨克羊脂肪组织MSTN基因表达量与DNA甲基化概率呈显著强负相关(r=-0.74,P<0.05),巴什拜羊脂肪组织MSTN基因表达量与DNA甲基化概率呈强负相关(r=-0.99,P<0.05),虽然两个品种都呈负相关,但是巴什拜羊的相关系数较高。与体长的相关性相比,哈萨克羊各组织MSTN基因DNA甲基化概率较强于巴什拜羊,而与胸围的相关性相比较弱与巴什拜羊。6.萨克羊与巴什拜羊的MSTN基因SNP位点的研究根据高通量测序验证MSTN基因的SNP39、SNP40、SNP41突变位点。SNP39突变位点上有三种基因型为:AA、TG、GG,哈萨克羊和巴什拜羊AA基因型频率分别为:68.5%、70.8%,TG基因型频率分别为:26.2%、20.8%,GG基因型频率分别为:5.4%、8.5%。SNP40突变位点上有三种基因型为:AA、AT、TT,哈萨克羊和巴什拜羊TT基因型频率分别为:72.8%、79.0%,TA基因型频率分别为:18.4%、15.3%,AA基因型频率分别为:8.8%、5.65%。SNP41突变位点有两种基因型分别为:AAG、AA,此位点巴什拜羊无突变,哈萨克羊AAG基因型频率为89.2%、AA基因型频率为10.8%。