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Src是非受体蛋白酪氨酸激酶家族成员之一,属原癌基因,Src表达及活性异常往往引起乳腺癌、结肠癌、胰腺癌、前列腺癌、肺癌等某些肿瘤发生、发展。最近研究表明Src基因与小鼠乳腺的提前退化及泌乳失败相关。
本文以809头中国荷斯坦牛,136头鲁两黄牛,40头渤海黑牛为研究材料,采用巢式PCR、DNA测序和创造酶切位点法(CRS-PCR)及PCR-RFLP技术筛查Src基因SNP位点,通过比较研究中国荷斯坦牛与鲁西黄牛和渤海黑牛2个肉牛品种Src基因的多态性之间的差异,为牛群Src基因结构与功能的研究提供基础资料,并研究了Src基因内含子6、8和9区基因序列的单核苷酸多态性与中国荷斯坦牛泌乳性状的关联性,以及内含子6、8和9不同单倍型组合对泌乳性状的影响,为未来培育高乳蛋白及高产奶量奶牛提供参考依据。研究结果如下:
1.Src基因内含子6、8和9单核苷酸多态性及在不同牛群中的差异
以中国荷斯坦牛、鲁西黄牛和渤海黑牛为研究对象,对Src基因测序,结果发现了14062(C/T)、17302(G/A)和18107(T/C)共3个SNPs,均为首次报道的位点。Src基因14062(C/T)、17302(G/A)和18107(T/C)3个位点在中国荷斯坦牛和鲁西黄牛两个群体中的优势等位基因相同,分别为C、G、C,其等位基因频率分另为0.671/0.647、0.583/0.640、0.558/0.577,而渤海黑牛在这三个位点的优势等位基因分别为T、G、C,其等位基因频率分别为0.525、0.913、0.763。经X2适合性检验,中国荷斯坦牛、鲁西黄牛和渤海黑牛三个群体在14062(C/T)位点均达到Hardy-Weinberg平衡状态(P>0.05);在17302(G/A)位点则均未达到Hardy-Weinberg平衡状态(P<0.05);中国荷斯坦牛和鲁西黄牛在18107(T/C)位点均达到Hardy-Weinberg平衡状态(P>0.05),而渤海黑牛未达到Hardy-Weinberg平衡状态(P<0.05)。中国荷斯坦牛和鲁西黄牛在14062(C/T)和18107(T/C)位点均表现为中度多态(0.25<PIC<0.5);渤海黑牛在17302(G/A)位点表现为低度多态,而其它2个品种牛表现为中度多态。
2.Src基因三个内含子单位点基因型及基因型组合与中国荷斯坦牛泌乳性状关联分析
单位点基因型与产奶性状关联分析表明,各位点不同基因型对乳蛋白率、305 d产奶量、脂蛋白比、乳蛋白量及乳脂量有显著影响,对乳脂率无影响。第6、8和9内含子3个多态位点单倍型组合分析表明:共构建出8种单倍型,发现了27种单倍型组合;其中H2H4单倍型组合个体乳蛋白率最高;H6H6单倍型组合个体305 d产奶量最高。