酶法提取淫羊藿多糖及其对动物免疫功能的调节作用

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免疫是畜禽机体防卫外界病原微生物侵害的主要手段,也是现代化养殖保健的基础。免疫力低下是导致畜禽病毒性疾病、细菌性病发生的主要诱因之一,给畜牧养殖业造成极大的损失。具有多种生理活性,特别是促进细胞免疫和体液免疫的水平,提高动物机体的免疫力。所以,多糖作为一种优秀的免疫佐剂,具有很好的研究价值。为了深入探讨淫羊藿多糖的免疫学活性,本研究拟采用响应面法探讨淫羊藿多糖酶法提取工艺,优化最佳提取条件;通过正交优化,以多糖转移率为指标,探讨淫羊藿多糖最佳醇沉条件;以腹腔巨噬细胞释放NO的产量和淋巴细胞增殖率为指标,探讨不同醇沉浓度得到的淫羊藿多糖的活性及淫羊藿多糖体外对免疫细胞的作用;通过动物试验,考察淫羊藿多糖对新城疫(ND)抗体效价以及免疫器官组织结构的影响,系统地研究淫羊藿多糖促免疫作用机理,为临床获得提高免疫力的新中兽药提供理论依据。试验结果如下:1、响应面法优化纤维素酶辅助提取淫羊藿多糖工艺:采用纤维素酶辅助提取法,通过Box-Behnken三因素三水平的响应面法优化其提取因素,ANOVA方差分析结果以及两因素相互作用3D和等高线图显示,最佳提取条件为纤维素酶浓度110U/mL,酶提温度60℃,酶提时间100 min,淫羊藿多糖的提取率为10.06%,与预测值10.199%非常接近,可达预测值的98.6%。2、正交设计法优化淫羊藿多糖最佳醇沉条件:通过对L9(34)的正交试验结果进行方差分析显示,当浓缩比为1∶2,乙醇浓度为80%,乙醇体积倍数为4倍,醇沉时间为12 h时,淫羊藿多糖转移率达到72.27%,多糖转移率最高。3、淫羊藿多糖体外刺激巨噬细胞释放NO试验结果:5个不同醇沉浓度得到的淫羊藿多糖均能刺激巨噬细胞释放NO,醇沉浓度为50%时多糖活性最好,且具有剂量依赖作用,随着多糖浓度的升高NO释放量明显增大。4、淫羊藿多糖对鸡脾脏淋巴细胞最大安全浓度测定:通过MTT和细胞病变观察法,测得的淫羊藿多糖最大安全浓度为2500.00μg/m L。5、淫羊藿多糖促进鸡脾脏淋巴细胞增殖试验结果:在浓度312.502500.00μg/m L范围内,淫羊藿多糖单独和协同LPS均能显著促进脾脏淋巴细胞增殖,且均在浓度为1250.00μg/m L时,脾脏淋巴细胞增殖指数和增殖率最高。6、淫羊藿多糖促进鸡免疫效果试验结果:(1)在免疫后的不同时间,高剂量组和中剂量组新城疫抗体效价均显著(P<0.05)高于空白对照和免疫对照组;(2)通过对胸腺、脾脏、法氏囊三种免疫器官组织学观察,结果显示,淫羊藿多糖能够促进免疫器官的发育。
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