枯草芽孢杆菌LF17鉴定及对苹果树腐烂病生防作用效果研究

来源 :山西农业大学 | 被引量 : 2次 | 上传用户:liujunqiang6455314
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苹果树腐烂病(apple Valsa canker)由黑腐皮壳属真菌(Valsa spp.)引起,是一种毁灭性病害。生产中通过化学药剂防治腐烂病有其局限性,生物防治是现阶段研究的焦点。枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)已经显示出作为腐烂病生防菌的巨大潜力,然而目前研究关于提高枯草芽孢杆菌对腐烂病的抑菌防病机理稳定性的研究较少。针对这一问题,本研究对来源于苹果树上的细菌进行了鉴定,得到1株对苹果树腐烂病病原菌具有较好抑制作用的枯草芽孢杆菌,编号为LF17。重点对菌株LF17的抑菌机理、所含脂肽类抗生素相关基因、与钾联用的抑菌防病效果、促生作用、根施盆栽防效、在苹果砧木的定殖以及对土壤中的微生物的群落多样性影响等方面进行了较为详细的研究,主要结论为:(1)经形态学观察结合16S rDNA与gyrA基因序列分析,将菌株LF17为鉴定为枯草芽孢杆菌。抑菌机理研究结果表明:(1)菌株LF17发酵液对腐烂病菌有明显抑制作用,抑菌率高达93.80%,效果优于化学药剂;(2)枯草芽孢杆菌发酵液有效成分的挥发性气体较少,可降低在田间施用过程中可能造成的损失,有利于田间施用;(3)菌株LF17的发酵液经过越冬,地表及地下20 cm的活菌数相比对照,其差异不显著,表明在田间地表施用时温度对活菌的影响较小;(4)菌株LF17基因组中含有srfAB、yndJ、fenD、ituD及bamC共5种基因类型,不含ituC和sboA这2种基因类型。(2)通过对腐烂病的防病试验发现:(1)菌株LF17发酵液对腐烂病有较好抑制作用,且可促进病疤伤口的愈合,腐烂病复发率得到有效降低,田间防病效果高于化学药剂。且在施用枯草芽孢杆菌后,腐烂病伤口愈合面积的范围达到9.379.79 cm2,病疤复发率为3.82%4.56%;(2)经菌株LF17发酵液灌根处理后的苹果树,其腐烂病的扩展长度相比对照短减少了14.38%10.03%,对腐烂病的发生及病疤扩张有防治效果。其中经250mL发酵液处理的效果最佳。表明苹果树经发酵液根施后增强了树体的抗病性及对伤口的愈合能力。(3)枯草芽孢杆菌发酵液与钾联用后可有效增加发酵液中活菌数,提高抑菌率和抑菌的稳定性,表现为协同增效。其中发酵液与KH2PO4联用的抑菌效果最好,达到96.33%,高于KCl和K2SO4。(4)菌株LF17发酵液根施苹果砧木(八棱海棠)后,对植株生长有较好的促生作用,茎长增长率达到了12.35%15.59%,根长的增长率达到81.11%192.21%,且干重、湿重均显著高于对照;通过透射电镜检测发现,生防菌定殖在植株根、茎的表皮细胞和厚壁细胞的细胞间隙内以及维管束和薄壁细胞。表明枯草芽孢杆菌LF17可在植株体内定殖并对植株起到生长促进作用。(5)施用枯草芽孢杆菌LF17发酵液后会增加苹果树根部土壤中有益细菌群落及真菌群落的多样性,对根系菌群的丰富度和多样性影响较高。能明显改善土壤的微生物群落结构,促进养分分解,提高整体土壤质量及栽培环境。
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