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自身免疫性内耳病(autoimmune inner ear disease，AIED)是一种新的疾病实体，是目前少数几种经恰当治疗可获得较好疗效的内耳病之一。研究证实凋亡是许多内耳疾病发生、发展的共同基础之一，其中Caspase-3是关键的效应分子，它能使许多与细胞结构细胞周期及DNA修复等相关的蛋白或激酶失活，从而使细胞凋亡。本试验建立了Ⅱ型胶原诱导产生的大鼠自身免疫性内耳病模型，探讨内耳免疫反应与凋亡之间的相关性，从而为预防和治疗自身免疫性内耳病探索一条可行之路。
目的：
建立Ⅱ型胶原诱导产生的大鼠自身免疫性内耳病模型，研究内耳免疫反应中是否存在凋亡，以及细胞凋亡是否与Caspase-3信号转导有关。
方法：
选用耳廓反射灵敏的健康雌性SD大白鼠60只，随机分成实验组、佐剂组和对照组。其中实验组30只，首次皮下注射Ⅱ型胶原(400微克)与完全弗式佐剂(complete freundadjuvant，CFA)的乳浊液0.2ml，以后每周皮下注射Ⅱ型胶原(200微克)与不完全弗式佐剂(incomplete freundadjuvant，IFA)的乳浊液0.1ml。佐剂组15只，首次皮下注射CFA0.2ml，以后每周皮下注射IFA0.1ml。对照组15只予以等量生理盐水。免疫六周后，观察两周，于首次给药前一天和末次给药后一天行畸变产物耳声发射检测(distortion product otoacoustic emission，DPOAE)；末次畸变产物耳声发射检测结束后取眼内眦血行血清学检测；处死动物，取耳蜗行基底膜铺片光学检查；取耳蜗做冰冻切片通过TUNEL法检测内耳凋亡细胞，免疫组化检测内耳Caspase-3的表达。
结果：
1、DPOAE幅值检测免疫后，实验组部分鼠DPOAE幅值在1、2、4、6、8kHz较用药前明显下降(P<0.01),而且明显低于佐剂组和对照组用药后在相应频率的DPOAE幅值。
2、血清学检测实验组中有20只鼠浊度值大于正常浊度值均值加2个标准差，为免疫复合物阳性，提示免疫成功。实验组中出现听力下降者共18只鼠，22只耳。其中4只双耳、14只单耳出现听力下降，均伴有免疫复合物阳性，视为免疫成模组。
3、耳蜗基底膜铺片光镜观察免疫成模组可见部分外毛细胞纤毛缺损，结构不清，细胞排列不整齐，有多处散在空位，从顶回到底回，外毛细胞损伤程度逐渐加重；对照组、佐剂组及实验组中未出现听力下降者可见毛细胞排列规整，细胞间隔均匀，纤毛清晰，边界清楚，基本正常。
4、免疫组织化学染色结果免疫成模组动物切片Corti器、螺旋神经节细胞、血管纹和螺旋韧带上都有较强的Caspase-3蛋白表达；佐剂组、对照组及免疫未成模组Caspase-3表达阴性。
5、TUNEL染色结果免疫成模组Corti器、螺旋神经节细胞、血管纹和螺旋韧带上均可见TUNEL阳性细胞；Corti器中TUNEL阳性细胞主要见于外毛细胞和支持细胞；对照组、佐剂组及免疫未成模组切片仅在支持细胞、血管纹和螺旋神经节细胞中发现极少数TUNEL染色阳性细胞。
结论：
1、内耳免疫反应可以诱导细胞凋亡的发生。
2、内耳免疫反应诱导细胞凋亡的发生中有Caspase-3的激活。